一种基于Ion Torrent测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建方法

摘要

本发明公开了一种基于Ion Torrent测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建方法，包括多重PCR富集目的片段、引物清除、接头连接、文库扩增、文库检测等步骤。本发明的构建方法采用多对PCR引物对目的片段进行富集扩增，操作简单，成本低，降低了文库的损失，提高了文库构建成功率。本发明的文库构建方法适用于在Ion TorrentTM测序平台上进行BRCA1和BRCA2基因的DNA文库测序使用。

主权项

一种基于Ion Torren测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)目标区域扩增：将待测样本的DNA以及多重PCR引物，经多重PCR反应，得到第一样本；(2)引物清除：取第一样本与引物清除试剂混合进行反应，得到第二样本；(3)接头连接：将第二样本与接头P1进行接头连接反应，得到第三样本；(4)磁珠纯化：将第三样本进行磁珠纯化，得到第四样本；(5)文库扩增：将第四样本加入扩增酶Mix和扩增引物进行PCR扩增，并进行磁珠纯化，得到目的DNA文库；(6)文库检测：将得到的文库采用Qubit和11～13％的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测文库浓度、文库片段大小及文库质量，即得；所述11～13％的PAGE配方为：水，3～4mL；30％丙烯酰胺，2022～2062μL；5*TBE，1.2～1.8mL；9～11％AP，100～120μL；TEMED，9～11μL。