一种低β-葡萄糖苷酶纤维素酶添加剂的制备方法

摘要

本发明适用于饲料添加剂的技术领域，公开了一种低β-葡萄糖苷酶纤维素酶添加剂的制备方法，包括如下步骤：选取菌种、制备斜面孢子、制备孢子悬液、制备种子液、制备发酵料、发酵产酶培养、制备纤维素酶液、吸附脱附处理和后处理。本发明一种低β-葡萄糖苷酶纤维素酶添加剂的制备方法，步骤合理，选取里氏木霉生产制备纤维素酶，采用液态深层发酵法生产，可工业化大规模生产，采用低聚木糖生产废渣等作为纤维吸附基质，资源利用率高，并通过吸附脱附处理后，拆分去除溶于液相中的β-葡萄糖苷酶，降低了纤维素酶中β-葡萄糖苷酶的含量，通过试验得到最佳吸附条件为温度10℃，pH值7.0，吸附时间为30min，进一步提高了饲料中纤维低聚糖的含量。

主权项

一种低β‑葡萄糖苷酶纤维素酶添加剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一、选取菌种：选取木霉属中的里氏木霉作为生产纤维素酶的菌株；步骤二、制备斜面孢子：将选取的里氏木霉接种至PDA斜面培养基中，并置于生化培养箱中，在温度为24～30℃、相对湿度为95～97％的恒温恒湿暗环境下培养5～7天，直至里氏木霉菌丝表面形成一层分生孢子层，于4℃温度下保存备用；步骤三、制备孢子悬液：用无菌水洗下步骤二处理得到的分生孢子，并稀释孢子浓度至10⁸个/mL，备用；步骤四、制备种子液：在250mL的三角瓶中装入50mL液态种子培养基，并用纱布封口，灭菌处理后，在无菌环境中取1mL经步骤三得到的孢子悬液接种至液态种子培养基中，然后置于恒温培养振荡器中培养2～3天，使孢子萌发得到纤维素酶种子液，备用；步骤五、制备发酵料：将秸秆、稻草、麦麸等纤维原料粉碎至20目以下，预处理并灭菌处理后冷却，得到无菌发酵料；步骤六、发酵产酶培养：将步骤四得到的种子液与步骤五得到的无菌发酵料以质量比为1：10～12的比例均匀接种至液体培养基中，接种量为4～5％，并按照50～60％的装入量装入发酵罐中，发酵罐中的发酵液初始pH值控制在4～7、温度控制在28～32℃进行发酵产酶处理，发酵时间为72～96小时；步骤七、制备纤维素酶液：将经过步骤六处理得到的发酵液在离心机中离心处理，得到纤维素酶液，备用；步骤八、吸附脱附处理：取经步骤七得到的纤维素酶液与纤维吸附基质以一定的比例混合加入离心机中，并加入2～4倍水静置，静置一段时间后，开启离心机离心脱附处理，去除液相中的β‑葡萄糖苷酶；步骤九、后处理：取出经步骤八处理后的离心机中的低β‑葡萄糖苷酶的物料，可直接用作绿色饲料添加剂进行饲喂，纤维低聚糖含量高。