一种快速获得三七圆斑病菌分生孢子的活体接种产孢方法

摘要

本发明公开了一种快速获得三七圆斑病菌分生孢子的活体接种产孢方法，包括以下步骤：步骤1：病原菌的培养；步骤2：产孢装置；步骤3：接种叶片；步骤4：分生孢子的诱导：3d左右以后，当菌丝侵染叶片形成明显肉眼可见的病斑后，随即去除菌饼，继续喷雾保湿，于接种后6d左右在病斑处产孢，10d后每个叶片上产生的分生孢子达10⁴个左右，分生孢子产生后若要使用应及时将其用无菌水洗下，每个产孢的叶片用移液器吸取1mL无菌水进行冲洗即可，每个叶片可得到1mL的分生孢子悬浮液。与现有技术相比，本发明的有益效果为：在较短的时间内获得可供科学试验研究的槭菌刺孢的分生孢子，确保试验的稳定性、可操作性和可重复性。

主权项

一种快速获得三七圆斑病菌分生孢子的活体接种产孢方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：病原菌的培养:无菌条件下，用打孔器分别打取槭菌刺孢单孢菌株的菌饼接种至培养基上，置于一定温度下光照培养箱中全光照连续培养15d，以供产孢接种使用；步骤2：产孢装置：挑选健康无病的一年生三七植株，用75％乙醇进行喷雾表面消毒，再用无菌水冲洗干净，将消毒好的三七植株移栽至盛有灭菌基质的育苗盆中，接种后用能够将容器和植株一同罩住的自封袋袋口朝上套上即可，小型喷雾器喷雾保湿后，密封好自封袋的袋口；步骤3：接种叶片：取按照步骤一培养好的纯培养菌株，用打孔器打取的菌饼，在步骤二的叶片中央用无菌针刺伤一个小点，将打好的菌饼移至已刺伤的叶片中央，用无菌水对已接种的叶片进行喷雾保湿，置于20℃光照培养箱中，全光照培养，持续保湿；步骤4：分生孢子的诱导：2‑3d以后，当菌丝侵染叶片形成明显肉眼可见的病斑后，随即去除菌饼，继续喷雾保湿，于接种后6d开始在病斑处产孢，10d后每个叶片上产生的分生孢子达10⁴个左右，分生孢子产生后若要使用应及时将其用无菌水洗下，每个产孢的叶片用移液器吸取1mL无菌水进行冲洗即可，每个叶片可得到1mL的分生孢子悬浮液。