微量DNA 中甲基化CpG 岛高通量测序方法

摘要

本发明提供一种微量DNA中甲基化CpG岛高通量测序方法，包括步骤：1)将DNA样品进行亚硫酸盐处理；2)将步骤1)中获取的处理样品加入到含有引物A的PCR体系中进行线性扩增；3)向步骤2)中的PCR产物中加入具有单链DNA剪切活性的核酸外切酶，反应后使核酸外切酶失活；4)将步骤3)中的产物加入到含有引物B的PCR体系中进行线性扩增；5)将步骤4)中的产物加入含有相应接头引物C和接头引物D的PCR体系中进行扩增；6)将步骤5)中的PCR产物进行纯化获得具有特异长度的DNA文库，并进行测序。本发明采用多步PCR的方法直接富集微量DNA序列中甲基化CpG岛序列对待测目的片段进行高通量测序效率极高。

主权项

一种微量DNA中甲基化CpG岛高通量测序方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将获得的微量DNA样品进行亚硫酸盐处理，获取单链的经亚硫酸盐转换的DNA样品；2)将步骤1)中获取的处理样品加入到含有引物A的PCR体系中，并在PCR仪器中进行线性扩增；3)向步骤2)中的PCR产物中加入具有单链DNA剪切活性的核酸外切酶，于37℃中反应30分钟，然后升高温度使所述核酸外切酶失活；4)将步骤3)中的酶消化产物加入到含有引物B的PCR体系中并进行线性扩增；5)将步骤4)中的PCR产物体系再加入含有相应接头引物C和接头引物D的PCR体系中进行PCR扩增；6)将步骤5)中的PCR产物进行具有尺寸选择性的纯化方式获得具有特异长度的DNA文库，并根据测序仪要求的质控鉴定后进行高通量测序。