发明名称 |
实时荧光定量PCR鉴别蕲蛇的方法 |
摘要 |
本发明提供了一种实时荧光定量PCR鉴别蕲蛇的方法,旨在提供一种具有操作简单、时间短、准确率高,不易造成污染的实时荧光定量PCR鉴别蕲蛇的方法,该方法依次包括下述步骤:1)引物稀释放-20℃保存备用;2)样品前处理取试样中段的肌肉组织剪碎,加入研钵中研成粉末,称取30mg至2ml灭菌离心管中;3)模板DNA提取前处理好的样品,提取DNA,置-20℃保存备用;4)配置PCR反应液配;5)加模板往上述PCR管中加入2μl提取好的DNA,加样顺序为阴性对照、待检样品、阳性对照,敲打PCR管盒,使反应液与DNA混匀,并经3000转离心30秒,立即进行PCR反应;6)荧光定量PCR测试;7)结果判定;属于化学检测技术领域。 |
申请公布号 |
CN105695611A |
申请公布日期 |
2016.06.22 |
申请号 |
CN201610235100.1 |
申请日期 |
2016.04.15 |
申请人 |
广西壮族自治区梧州食品药品检验所 |
发明人 |
陈学松;黄林杰;罗达龙;黄琳 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
广州市越秀区海心联合专利代理事务所(普通合伙) 44295 |
代理人 |
黄为;蔡国 |
主权项 |
一种实时荧光定量PCR鉴别蕲蛇的方法,其特征在于,依次包括下述步骤:1)引物稀释放‑20℃保存备用;2)样品前处理取试样中段的肌肉组织剪碎,加入研钵中研成粉末,称取30mg至2ml灭菌离心管中;3)模板DNA提取前处理好的样品,提取DNA,置‑20℃保存备用;4)配置PCR反应液配每次PCR实验需要阴性对照、阳性对照各一个,共制备7管,按照以上顺序依次加入试剂至干净的离心管中,涡旋振荡混匀后,放冰盒上待用;将灭菌的PCR八联管固定在PCR管盒上,将冰盒上的反应液离心后,打开盖子,加至PCR管中,每管18μl;5)加模板往上述PCR管中加入2μl提取好的DNA,加样顺序为阴性对照、待检样品、阳性对照,敲打PCR管盒,使反应液与DNA混匀,并经3000转离心30秒,立即进行PCR反应;6)荧光定量PCR测试仪器参数:检测模式为荧光通道,反应总体积为20μl,染色,依次选择“预变性”和“二步扩增”,收集荧光;PCR反应参数:95℃预变4min,然后进行45个循环:95℃变性30s,63℃复性45s并采集荧光;7)结果判定阴性对照需无Cq值,曲线为直线或轻微斜线,无明显指数增长期;阳性对照需Cq≤30,曲线有明显指数扩增期;无Cq值,曲线为直线或轻微斜线,无明显指数增长期,可报告样品阴性;Cq值≤36,曲线有明显指数扩增期,可直接报告样品阳性。 |
地址 |
543000 广西壮族自治区梧州市西环路中段198号 |