一种基于NP-NiGd@Au的胃癌标志物金纳米簇电致化学发光传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种基于NP-NiGd@Au的胃癌标志物金纳米簇电致化学发光传感器的制备方法及应用，属于电化学发光传感器领域。以金纳米簇为电化学发光信号源，利用纳米多孔材料NP-NiGd@Au优良的生物兼容性和大的比表面积增加抗体的固载量。用氧化石墨烯固载金纳米簇AuNCs@BSA作为二抗标记物。根据对不同浓度的待测物的电化学发光信号强度的不同，实现对胃癌标志物的检测。

主权项

一种基于NP‑NiGd@Au的胃癌标志物金纳米簇电致化学发光传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）NP‑NiGd@Au的制备将NiGdAl合金放入过量的1.5 ～ 2.5 mol/L的氢氧化钠溶液中，在室温下化学腐蚀32 ～ 74 h，离心洗涤至中性，在真空干燥箱里干燥12 ～ 48 h，制得纳米多孔NiGd；将80 ～ 120 mL，质量分数为0.005 ～ 0.015%的氯金酸溶液煮沸，加入2 ～ 3 mL，质量分数为0.5 ～ 1.5%的柠檬酸三钠水溶液，加热回流10 ～ 20 min，待溶液颜色变成酒红色，将溶液冷却至室温，得到的金纳米粒子，4 ℃下避光保存；将1 ～ 3 mg的NP‑NiGd分散到1 mL超纯水中，加入0.5 ～ 1.5 mL金纳米粒子，得到的混合溶液在室温下振荡12 ～ 32 h，离心分离，除去过量的金纳米粒子，并将产物NP‑NiGd@Au重新分散到1 mL超纯水中，制得基底材料NP‑NiGd@Au溶液；（2）捕获抗体基底材料NP‑NiGd@Au/Ab₁溶液的制备在基底材料NP‑NiGd@Au溶液中，加入10 ～ 100 μL、1 mg/mL的待测物抗体Ab₁溶液，在4 ℃下振荡孵化24 h，离心除去过量的待测物抗体Ab₁，将产物分散到1 mL、pH 7.4的PBS溶液中，制得捕获抗体基底材料NP‑NiGd@Au/Ab₁溶液，储存在4 ℃下备用；（3）氧化石墨烯GO的制备将0.2 ～ 0.4 g石墨和1.5 ～ 2.1 g高锰酸钾加入到带有磁子的500 mL三口烧瓶中，加入提前混合好的体积比为9:1 的浓硫酸和浓磷酸混合液，30 ～ 70 ℃下反应6 ～ 24 h，反应结束后，将样品倾倒在预先冻好的30 ～ 50 mL的冰块上，缓慢的搅拌下加入200 ～ 400 μL，质量分数为30%的过氧化氢，反应20 ～ 40 min，离心分离，并依次用0.2 mol/L的盐酸溶液，乙醇洗涤三次，最后用乙醚离心洗涤一次，得到的固体在35 ℃下真空干燥，得到棕黄色的固体粉末；（4）金纳米簇AuNCs@BSA的制备将0.3 ～ 0.8 mmol氯金酸乙醇溶液和0.5 mmol巯基琥珀酸MSA通过通氮气鼓泡的方法与100 mL甲醇混合均匀，在剧烈搅拌下逐滴加入20 ～ 30 mL，0.1 ～ 0.3 mol/L的新鲜配置的硼氢化钠溶液，生成的深棕色的沉淀，离心分离并用体积比为1:4的水/乙醇溶液洗涤，在真空下干燥，得到MSA@AuNCs 固体；MSA@AuNCs和BSA以质量比为1:10的比例加入5 mL水中，搅拌3 ～ 8 min，用1 ～ 3 mol/L的氢氧化钠调节溶液pH为12，37 ℃下搅拌6 ～ 8 h，得到的产物透析24 h，冷冻干燥得到AuNCs@BSA；（5）二抗标记物GO/AuNCs@BSA/Ab₂溶液的制备将1 ～ 3 mg的氧化石墨烯GO和2 mg的AuNCs@BSA加入2 mL超纯水中，振荡32 ～ 72 h，离心并重新分散到1 mL，pH 7.4的PBS缓冲溶液中，加入0.05 ～ 0.15 mg待测物抗体Ab₂，在4 ℃下孵化12 ～ 32 h，离心并重新分散到1 mL，pH 7.4的PBS缓冲溶液中，储存在4 ℃备用；（6）胃癌标志物金纳米簇电致化学发光传感器的制备a. 将直径4 mm的玻碳电极依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化铝抛光粉依次做抛光处理，用超纯水冲洗干净；b. 滴涂6 μL、0.5~2 mg mL^‑1的捕获抗体基底材料NP‑NiGd@Au/Ab₁溶液于电极表面，4 ℃保存至干燥；c. 滴加4 μL、质量分数为1~3%的牛血清白蛋白溶液，以封闭电极表面的非特异性活性位点，用pH 6.4~8.4的PBS溶液冲洗电极表面，4 ℃晾干；d. 滴加6 μL 不同浓度的待测物抗原，4 ℃下孵化30 min，用pH 6.4~8.4的PBS溶液冲洗电极表面，4 ℃晾干；e. 滴涂6 μL二抗标记物GO/AuNCs@BSA/Ab₂溶液，用pH 6.4~8.4的PBS溶液冲洗电极表面，4 ℃晾干。