一种Pt-氮化碳/石墨烯胰腺癌肿瘤标志物CA199生物传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种Pt-氮化碳/石墨烯胰腺癌肿瘤标志物CA199生物传感器的制备方法及应用，属于新型功能材料、生物传感检测技术领域。Pt纳米粒子对双氧水具有良好的催化性能，利用氮化碳/石墨烯大的比表面积将Pt纳米粒子固载在氮化碳/石墨烯的表面作为检测抗体标记物，实现了对胰腺癌肿瘤标志物CA199的超灵敏检测，对肿瘤标志物的早期诊断及愈后判断具有重要的意义。

主权项

一种Pt‑氮化碳/石墨烯胰腺癌肿瘤标志物CA199生物传感器的制备方法，Pt‑氮化碳/石墨烯‑抗体溶液的制备，包括以下步骤：（1）氧化石墨烯的制备将0.3~0.6g石墨和1.8~3.6g高锰酸钾加入500 mL的烧瓶中，将36~72 mL的H₂SO₄和4~8 mL的H₃PO₄混合后加入烧瓶中，50℃加热回流12 h，将混合物倒在40~80 mL冰上，加入0.6~2 mL的双氧水，搅拌30 min，离心后，分别用0.2 mol/L的盐酸、乙醇、乙醚洗涤，40℃下真空干燥，制得氧化石墨烯；（2）聚吡咯/氧化石墨烯的制备将5~10 g的CTAB溶解于80 mL、1 mol/L的HNO₃溶液中，在搅拌下，加入0.05~0.2 g氧化石墨烯，加热到100℃下，加入0.2~1 g吡咯，持续加热60 min，加入1~3 g过硫酸铵，反应180 min，混合物经离心、洗涤后，40℃下真空干燥，制得聚吡咯/氧化石墨烯；（3）检测抗体标记物—Pt‑氮化碳/石墨烯的制备在氩气的气氛下，将聚吡咯/氧化石墨烯800℃煅烧2 h，制得氮化碳/石墨烯，将2~10 mg氮化碳/石墨烯和1~3 mL、3 mg/mL的K₂PtCl₄/EG加入到10 mL EG中，超声0.5 h，随后加入5~10 mL EG和0.2 mL、2 mol/L的NaOH/EG，在功率为300 W下，微波反应110 s，混合物经过离心、洗涤后，60℃下真空干燥，制得Pt‑氮化碳/石墨烯；（4）Pt‑氮化碳/石墨烯‑抗体溶液的制备将1~5 mg的Pt‑氮化碳/石墨烯分散于1 mL超纯水中，与1 mL、5~12 μg/mL的检测抗体溶液混合，在4℃下振荡孵化12 h，离心分离，将下层沉淀分散于1 mL、1/15 mol/L的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液中，制得检测抗体孵化物—Pt‑氮化碳/石墨烯‑Ab₂溶液，4℃下保存备用。