人源化抗体表达载体及其构建方法

摘要

本发明公开了一种人源化抗体表达载体及其构建方法，是通过将含有2A序列的轻链的恒定区基因序列CL-2A和重链的恒定区基因序列CH，分别与pMD18-T载体连接得到pMD18-T-CL-2A质粒和pMD18-T-CH质粒，将pMD18-T-CL-2A质粒和真核表达载体双酶切后连接得到含CL-2A的真核表达载体，再与pMD18-T-CH质粒连接而得到含CL-2A-CH的真核表达载体。本发明的表达载体构建方法只需要将鼠源或者人源抗体的可变区序列插入到相应的位点就能快速构建全长的完整抗体序列，简单实用，用于快速构建嵌合抗体，人源化抗体等。

主权项

一种人源化抗体表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将碱基组成如SEQ ID NO:6所示的含有2A序列的轻链λ的恒定区基因序列CL‑2A与碱基组成如SEQ ID NO:7所示的重链γ1的恒定区基因序列CH分别与pMD18‑T载体连接，转化大肠杆菌，筛选阳性克隆，得到pMD18‑T‑CL‑2A质粒和pMD18‑T‑CH质粒；(2)将pMD18‑T‑CL‑2A质粒和真核表达载体分别用HindIII和BamHI进行双酶切，将分离纯化后的酶切产物进行连接，转化大肠杆菌，筛选获得含CL‑2A的真核表达载体；(3)将步骤(2)的含CL‑2A的真核表达载体和步骤(1)的pMD18‑T‑CH质粒分别用XhoI和XbaI进行双酶切，将分离纯化后的酶切产物进行连接，转化大肠杆菌，筛选获得人源化抗体表达载体。