一种用于枯草芽孢杆菌基因组编辑的CRISPRCas9系统及其构建方法

摘要

本发明公开了一种用于枯草芽孢杆菌基因组编辑的CRISPRCas9系统及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明构建敲除质粒PHY300dsrf，该质粒包含特异性靶向目的基因的sgRNA、cas9基因、同源修复臂、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的复制原点及抗性筛选标记。本发明所设计的特异性靶向srfA-C基因的sgRNA，可以指引cas9蛋白在srfA-C基因的特异性位点切割双链，然后再同源修复臂的指导下对基因组进行精确地同源性重组，在断裂处引入XhoI酶切位点。在对srfA-C基因敲除成功的枯草芽孢杆菌进行上罐发酵培养，泡沫显著减少，证明该CRISPR/Cas9基因编辑系统可以有效的对枯草芽孢杆菌基因组进行基因编辑。

主权项

一种用于枯草芽孢杆菌基因组编辑的CRISPR/Cas9系统，其特征在于，所述CRISPR/Cas9基因编辑系统建立在单个敲除质粒PHY300dsrf的基础上；PHY300dsrf包含sgRNA、cas9基因、同源修复臂、大肠杆菌复制原点p15A、温度敏感的复制原点PE194、氨苄青霉素筛选标记基因和四环素筛选标记基因。