一种卡那霉素残留的检测方法

摘要

一种基于适体引发的核酸外切酶III(Exo III)循环酶切的卡那霉素残留的检测方法及其应用，属于分析化学技术领域。本发明主要是利用巯基自组装的方式，将与卡那霉素适配体(K-aptamer)互补的单链DNA(ssDNA)修饰于金电极表面，加入少量K-aptamer与其配对形成少量双链DNA(dsDNA)。随后加入Exo III，利用可特异性的酶切dsDNA中的ssDNA使得剩余的适配体释放，重新与ssDNA结合形成dsDNA，引发再次酶切，若干循环后使得修饰ssDNA酶切完全。体系存在卡那霉素，通过与适配体的结合抑制循环酶切使ssDNA得以保留，且保留量与卡那霉素的浓度相关。利用电分析方法对ssDNA可静电吸附电信号分子六氨合钌(RuHex)进行定量实现卡那霉素残留的检测。该方法具有较高灵敏度，可实现牛奶中卡那霉素残留的灵敏测定。

主权项

一种基于适体引发的核酸外切酶III(Exo III)循环酶切的卡那霉素残留的检测方法，其特征在于电极表面修饰的单链DNA(ssDNA)与少量卡那霉素适体(K‑aptamer)配对结合形成双链DNA(dsDNA)，得到存在少量dsDNA和大量ssDNA的电极修饰界面；加入核酸外切酶III(Exo III)，利用Exo III特异性的酶切dsDNA中ssDNA的特性，使得dsDNA中ssDNA逐渐水解，与此同时促使与之结合的K‑aptamer释放，释放的K‑aptamer又可以重新和电极表面的ssDNA结合形成dsDNA，促使Exo III循环酶切；当体系存在卡那霉素时，卡那霉素与K‑aptamer可特异性结合，这种结合会抑制Exo III的循环酶切，使得电极表面的ssDNA得以保留且保留量与卡那霉素的浓度相关；利用ssDNA可吸附电信号分子六氨合钌(RuHex)，采用电分析方法对电极表面吸附的RuHex进行定量，通过制定标准曲线，即可实现卡那霉素残留的灵敏检测。