高保真度限制性内切核酸酶

摘要

提供针对具有改变性质的酶的组合物和方法，其包括诱变的系统方法和允许选择希望的蛋白质的筛查分析。该方法的实施方式特别适于改变限制性内切核酸酶的特定性质如星号活性。该组合物包括具有减少星号活性的限制性内切核酸酶，如通过总保真度指数改进因子限定的。

主权项

组合物，其包括：具有导致至少2的总保真度指数(FI)改进因子的人工引入突变的限制性内切核酸酶，其中所述因子是通过凝胶电泳测定的在限定组的缓冲液中，突变体的切割活性对不具有可检测星号活性的未突变限制性内切核酸酶的切割活性的最佳比率，所述人工引入突变包括用带相反电荷的丙氨酸或苯丙氨酸置换天然存在的残基，其中所述总保真度指数(FI)改进因子是指在选择的缓冲液组中具有最大切割活性的突变体的最高FI除以具有最大切割活性的相应WT内切核酸酶的最高FI，并且保真度指数是指在一种缓冲液中不具有星号活性的限制性内切核酸酶的最高浓度除以使底物完全消化的最低浓度的比率。