卡培立肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种采用Fmoc路线固液结合片段法合成卡培立肽的方法，该方法中多个片段合成同时进行，合成周期减少了2/3，中间体易纯化，成本低，最终产品纯度高，副产物少，产品收率高，利于卡培立肽的大规模生产。

主权项

一种制备卡培立肽的方法，包括以下步骤：1)在固相载体上采用固相Fmoc路线分别合成3个侧链全保护肽树脂A’、B’和C’，然后将其裂解得到3个侧链全保护肽片段A、B和C，其氨基酸序列分别为，片段A：Boc‑Ser(tBu)‑Leu‑Arg(pbf)‑Arg(pbf)‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Cys(Trt)‑Phe‑Gly，片段B：Fmoc‑Gly‑Arg(pbf)‑Met‑Asp(OtBu)‑Arg(pbf)‑Ile‑Gly‑OH，片段C：Fmoc‑Ala‑Gln(Trt)‑Ser(tBu)‑Gly‑Leu‑Gly‑OH，和在固相载体上采用固相Fmoc路线合成肽树脂片段D，其氨基酸序列为D：Fmoc‑Cys(trt)‑Asn(Trt)‑Ser(tBu)‑Phe‑Arg(pbf)‑Tyr(tBu)‑Resin；2)将所述步骤1)得到的侧链全保护肽片段C与肽树脂片段D偶联得到肽树脂Ⅰ；3)将所述步骤1)得到的侧链全保护肽片段B与所述步骤2)得到的肽树脂Ⅰ偶联得到肽树脂Ⅱ；4)将所述步骤1)得到的侧链全保护肽片段A与所述步骤3)得到的肽树脂Ⅱ偶联得到卡培立肽肽树脂III；5)将所述步骤4)得到的卡培立肽肽树脂III裂解得到卡培立肽线性肽粗品；6)将所述步骤5)得到的卡培立肽线性肽粗品液相氧化，得到环化的卡培立肽粗品；7)所述步骤6)得到的卡培立肽粗品经纯化得到产品卡培立肽；其中，所述步骤1)中合成所述肽树脂A’、B’和C’所采用的固相载体为2‑CTC树脂，所述树脂替代度范围为0.3‑1.1mmol/g；合成所述肽树脂A’、B’和C’所采用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或TBTU/HOBt/DIEA；裂解所述侧链全保护肽树脂A’、B’和C’所采用的裂解液为TFE：DCM＝1:4(V:V)；所述步骤1)中合成所述肽树脂片段D所用的固相载体为wang树脂或者2‑CTC树脂，所述树脂替代度范围为0.3‑0.6mmol/g，在所述树脂上连接第一个氨基酸所使用的偶联剂为a)所用树脂为wang树脂时所用偶联剂为HOBt/DIC/DMAP；b)所用树脂为2‑CTC树脂时所用偶联剂为DIEA，第二个氨基酸及之后氨基酸的偶联所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或TBTU/HOBt/DIEA；所述步骤2)中将侧链全保护肽片段C和肽树脂片段D偶联，得到肽树脂I，其中所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或HBTU/HOBt/DIEA，所采用的溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO或其任意两者或两者以上的混合物；所述步骤3)中将侧链全保护肽片段B和所述肽树脂I偶联，得到肽树脂II，其中所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或HBTU/HOBt/DIEA，所采用的溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO或其任意两者或两者以上的混合物；所述步骤4)中将侧链全保护肽片段A和肽树脂II偶联，得到肽树脂III，其中所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或HBTU/HOBt/DIEA，所采用的溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO或其任意两者或两者以上的混合物；所述步骤5)中用于裂解卡培立肽肽树脂III的裂解液选自TFA:H₂O＝95:5(V:V)、TFA:EDT:PHOH:H₂O＝(90‑95):(1‑5):(1‑3):(1‑2)(V:V)或TFA:PhSMe:TIS:PHOH:H₂O＝(80‑85):(1‑5):(1‑5):15:(1‑5)(V:V)，裂解时间为2‑3.5小时；并且所述步骤6)中用于氧化卡培立肽线性肽的物质选自DMSO、碘或H₂O₂。