发明名称 一种天然组织来源的全椎间盘脱细胞材料的制备方法
摘要 本发明公开了一种天然组织来源的全椎间盘脱细胞材料及其制备方法,本发明取脊椎动物椎间盘,摘除骨性碎片,无菌PBS漂洗3次,然后在浓度为10%的含10KIU/ml蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液中,在摇床150rpm震荡4小时;再在浓度为4%的含Triton X-100的PBS缓冲液,加入混合抗菌液,在摇床150rpm震荡48小时;接着用浓度为5%的含SDS的PBS缓冲液,加入的混合抗菌液,在摇床150rpm震荡48小时;最后用浓度为0.5mg/ml的含DNA酶的PBS缓冲液,加入混合抗菌液,在摇床150rpm震荡12小时,再用PBS冲洗1小时,本发明取材广,安全性高,能实现正常椎间盘重构。
申请公布号 CN104307044B 申请公布日期 2016.06.08
申请号 CN201410538175.8 申请日期 2014.10.13
申请人 浙江大学医学院附属邵逸夫医院 发明人 林贤丰;范顺武;胡志军
分类号 A61L27/36(2006.01)I 主分类号 A61L27/36(2006.01)I
代理机构 杭州求是专利事务所有限公司 33200 代理人 杜军
主权项 一种天然组织来源的全椎间盘脱细胞材料的制备方法,其特征在于,该方法具体包括以下步骤:(1)取脊椎动物椎间盘,摘除骨性碎片,无菌PBS漂洗3次,每次漂洗20分钟,去除血液、残余肌肉组织和韧带;(2)在浓度为10%的含10KIU/ml蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液中,恒温45℃摇床150rpm震荡4小时;并用PBS冲洗1小时;(3)在浓度为4%的含Triton X‑100的PBS缓冲液,加入10KIU/ml青霉素和10g/ml链霉素的混合抗菌液,缓冲液和混合抗菌液体积比为5:1,恒温45℃摇床150rpm震荡48小时;并用PBS冲洗1小时;所述的混合抗菌液由青霉素和链霉素组成,青霉素和链霉素的体积比为1:1;(4)浓度为5%的含SDS的PBS缓冲液,加入10KIU/ml,10g/ml的混合抗菌液,缓冲液和混合抗菌液体积比为5:1,恒温45℃摇床150rpm震荡48小时;再用PBS冲洗1小时;所述的混合抗菌液由青霉素和链霉素组成,青霉素和链霉素的体积比为1:1;(5)浓度为0.5mg/ml的含DNA酶的PBS缓冲液,加入10KIU/ml,10g/ml的混合抗菌液,缓冲液和混合抗菌液体积比为5:1,37℃摇床150rpm震荡12小时,再用PBS冲洗1小时,所述的混合抗菌液由青霉素和链霉素组成,青霉素和链霉素的体积比为1:1。
地址 310016 浙江省杭州市江干区庆春东路3号