一种主产纤维素酶饲用益生菌制剂的液态发酵生产方法

摘要

本发明公开了一种主产纤维素酶的饲用益生菌制剂的发酵生产方法，其采用液态发酵工艺，利用芽孢杆菌和酿酒酵母进行混合菌群联合发酵生产饲用益生菌制剂，发酵后期添加辅料干燥制成。该方法制备的产品具有高活性的纤维素酶，兼有多种消化酶活力，饲用纤维素酶制剂与益生菌制剂两大功能合二为一，避免环境污染，且降低后续酶制剂的回收纯化成本；效率高，增加动物对饲料产品的适口性，有助于动物对饲料营养的吸收，适宜大规模生产与推广，对畜禽养殖业的健康养殖具有良好推动作用。

主权项

一种主产纤维素酶饲用益生菌制剂的液态发酵生产方法，其特征在于其包括如下步骤：1）发酵菌种的制备：菌种为芽孢杆菌和酿酒酵母；将试管斜面保存的菌种转接活化培养基，28‑32℃的旋转摇床上培养20‑35小时至菌种的对数生长期；所述的芽孢杆菌的活化培养基的配方组分以g/L计：酵母粉 5‑8，蛋白胨 10‑16，氯化钠 6‑12，pH 7.0；所述的酿酒酵母的活化培养基的配方组分以g/L计：酵母粉 2‑6，蛋白胨 10‑15，葡萄糖 20‑30，pH 6.5；活化培养基在使用前均在115℃下灭菌20分钟；所述的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌的至少两种；所述的芽孢杆菌从中国农业微生物菌种保藏中心（ACCC）获得，其中枯草芽孢杆菌是ACCC 编号为03291、03282、03338、04303、03317中的一种；地衣芽孢杆菌是ACCC 编号为03314、02367、05186中的一种；短小芽孢杆菌是ACCC 编号为02757、04309、04305、04301、04297中的一种；2）发酵用液体培养基的制备：发酵用液体培养基的配方组分以g/L计为：啤酒糟的干燥粉碎物 5‑20，玉米面 40‑60，葡萄糖 10‑20，蛋白胨 10‑20，酵母粉 5‑10，磷酸氢二钾 3‑6，磷酸二氢钠 3‑6，七水硫酸镁 0.5‑2，pH 6.5—7.5；3）主产纤维素酶的饲用益生菌混合发酵：采用步骤2所述的液体发酵培养基进行阶段式混合菌种发酵；首先按照5—10%v/v 的单菌接种量接入芽孢杆菌的活化菌种，通过发酵罐转速和无菌空气流量的调节使溶解氧控制在10%以上；上述发酵培养阶段进行20‑40小时后，添加按照6‑15% v/v 的接种量接入酿酒酵母活化菌种，同时通过流加补料方式补充葡萄糖至终浓度为2‑5g/L，通过发酵罐转速和无菌空气流量的调节使溶解氧控制在2%以上；待酿酒酵母发酵培养8‑12小时后终止发酵过程；4）辅料添加：发酵终止后，加入辅料增加固形物含量，辅料添加量为发酵液体积的20—50%，并搅拌均匀；辅料组成按重量比计算：玉米面20—30%，酒糟粉碎物30—50%，麸皮粉碎物20—50%；5）产品干燥包装：将4）步骤处理后的发酵液，在出风温度为80—85℃下，经喷雾干燥，包装获得成品。