一种用于靶向杂交捕获的修饰性DNA杂交探针的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于靶向杂交捕获的修饰性DNA杂交探针的制备方法主要方法为：制备DNA模板，PCR扩增，纯化PCR产物；对纯化后的PCR产物进行USER酶切割以及T4 DNA聚合酶末端平滑化，Lambda核酸外切酶水解产物的双链DNA中一条带有5′端磷酸化的单链，从而获得带有生物素标记的单链DNA；磁珠富集法纯化带有生物素标记的单链DNA，得修饰性DNA杂交探针。本发明极大了降低了生产成本、使用范围广，包括任意物种基因组的外显子区域、内含子区域、线粒体区域以及内含子区域等。所获得的DNA杂交探针可以应用于二代测序靶向文库的构建以及测序。

主权项

一种用于靶向杂交捕获的修饰性DNA杂交探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)通过平行制备寡核苷酸池获得包含目标序列以及通用引物区域的DNA模板；(2)使用Taq聚合酶以及含有dUTP的PCR引物进行PCR反应，同时在PCR过程中引入生物素标记的ATP和甲基化dm⁵CTP；(3)磁珠富集法纯化PCR产物；(4)对纯化后的PCR产物进行USER酶切割以及T4DNA聚合酶末端平滑化；(5)磁珠富集法纯化步骤(4)处理后的产物；(6)Lambda核酸外切酶水解步骤(5)纯化后产物的双链DNA中一条带有5′端磷酸化的单链，从而获得带有生物素标记的单链DNA；(7)磁珠富集法纯化带有生物素标记的单链DNA，得修饰性DNA杂交探针。