一种高效定点转基因的工具及其应用

摘要

本发明涉及基因工程领域，具体公开了一种高效定点转基因的工具。所述工具包含或可产生gRNA-不具备内切酶活性的Cas9蛋白-PB转座酶复合物，所述gRNA靶向基因组特定位点；所述不具备内切酶活性的Cas9蛋白为第十位氨基酸残基D突变为A、第840位氨基酸残基H突变为A的双突变Cas9蛋白。本发明通过设计靶向动物基因组的导向RNA(gRNA)，在gRNA与定点转座酶共表达情况下，PB转座酶随着CRISPR/cas9和gRNA的复合物靶向到基因组的特异位置，PB转座酶在特异的位点实现转座功能，如此同时共转染供体质粒(包含有外源目标基因的载体)，即可将外源的目标载体转座到基因组中特异性位点，从而实现定点转基因。

主权项

一种高效定点转基因的工具，其特征在于，所述工具包含或可产生：gRNA‑不具备内切酶活性的Cas9蛋白‑PB转座酶复合物，所述gRNA靶向基因组特定位点。