一种新型原核表达载体的构建及生防菌开发应用

摘要

本发明公开了一种新型原核表达载体的构建及生防菌开发应用，具体是这样实现的：为了实现在Burkholderla pyrrocinia JK-SH007生防菌中成功表达，通过现有发表文献，寻找适合的表达运载体.在保证目的蛋白上游的SD序列以及启动子区域的完整性同时，实现无缝克隆.通过ORF对ORF的方式替换掉原有载体的GFP，思路是通过利用原载体启动翻译GFP蛋白的启动子来翻译目的基因.通过重组构建验证，最终实现在生防菌中目的蛋白的表达.本发明得到一种新型的在保有原生防菌抑菌及促生功能的同时添加杀虫功能，经过验证获得表达的目的蛋白，具有重大生态意义。

主权项

一种新型原核表达载体的构建及生防菌开发应用，其特征在于，具体是这样实现的：(1)运载体的选择为了实现在Burkholderia pyrrocinia JK‑SH007生防菌中成功表达，通过现有发表文献，寻找适合的表达运载体.(2)目的基因与运载体的重组方式在保证目的蛋白上游的SD序列以及启动子区域的完整性同时，实现无缝克隆，通过ORF对ORF的方式替换掉原有载体的GFP，思路是通过利用原载体启动翻译GFP蛋白的启动子来翻译目的基因，通过重组构建验证，最终实现在生防菌中目的蛋白的表达.本发明最终得到一种新型的在保有原生防菌抑菌及促生功能的同时添加杀虫功能，经过验证获得表达的目的蛋白：通过将新构建的CRY218‑PHKT2原核表达载体导入由本实验室筛选出的具有生防特性的Burkholderia pyrrocinia JK‑SH007生防菌，成功获得具有可表达苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白的新型生防菌。