从红肉桃中分离提纯花色素苷的方法

摘要

本发明公开了从红肉桃中分离提纯花色素苷的方法，将红肉桃果实粉末，用体积比乙醇：水：甲酸：三氟乙酸=70:27:2:1的混合溶液为浸提剂浸提，依次经大孔树脂Amberlite XAD-7、葡聚糖凝胶SepHadex LH-20、大孔树脂SP700吸附洗脱纯化，真空浓缩后上反相C18色谱柱，根据所得的色谱图收集含红肉桃果肉中主导花色素苷组分的洗脱液，真空浓缩干燥得到花色素苷。本发明方法采用乙醇:水:甲酸:三氟乙酸浸提，依次经大孔树脂Amberlite XAD-7、葡聚糖凝胶SepHadex LH-20、大孔树脂SP700吸附洗脱；再利用高效液相色谱表征和收集，并浓缩，可得到纯度高达92.7%的矢车菊素 3-葡萄糖苷。本发明方法能有效分离提纯红肉桃果肉内的花色素苷，得到高纯度花色素苷单体，能较好地满足各种功能食品、保健品、药品添加剂的需求。

主权项

一种从红肉桃中分离提纯花色素苷的方法，其步骤包括：(1)红肉桃果肉材料的制备：取红肉桃果实果肉，液氮研磨成粉，‑70℃保存备用；(2)红肉桃果肉花色素苷粗提液A的制备：取一定量的红肉桃果实粉末，用体积比乙醇:水:甲酸:三氟乙酸＝70:27:2:1的混合溶液为浸提剂，浸提剂体积:粉末重量＝2mL:1g，避光超声波提取，然后在4℃下10000rpm离心10min，取上清液于30℃下真空浓缩至无乙醇，得到粗提液A；(3)红肉桃果肉花色素苷一次纯化液B的制备：取粗提液A用已活化的大孔树脂Amberlite XAD‑7吸附，待吸附结束，用三氟乙酸酸化的pH值调节到2‑3的80％乙醇将树脂柱上吸附的花色素苷洗脱下来，于30℃下真空浓缩至无乙醇，制得一次纯化液B；(4)红肉桃果肉花色素苷二次纯化液C的制备：取一次纯化液B用已处理平衡好的葡聚糖凝胶Sephadex LH‑20吸附，待吸附结束，用三氟乙酸酸化的pH值调节到2‑3的20％甲醇将树脂柱上吸附的花色素苷洗脱下来，于30℃下真空浓缩至无甲醇，制得二次纯化液C；(5)红肉桃果肉花色素苷提取浓缩液的制备：取二次纯化液C用已活化的大孔树脂SP700吸附，待吸附结束，用三氟乙酸酸化的pH值调节到2‑3的60％乙醇将树脂柱上吸附的花色素苷洗脱下来，收集洗脱液于30℃下真空浓缩至无乙醇，得到花色素苷提取浓缩液；(6)利用高效液相色谱表征、分离提纯花色素苷单体：取一定量的花色素苷提取浓缩液，上反相C18色谱柱，分离条件为：流动相A：甲醇:磷酸:三氟乙酸＝97:2:1V/V；流动相B：水:磷酸:三氟乙酸＝97:2:1V/V；流速：1.0ml/min；波长：515nm；柱温：25℃；梯度冲洗：0～17min，流动相B从95‑44％；17～20min，流动相B从44‑95％；用紫外检测器检测洗脱液，根据所得的色谱图收集含红肉桃果肉中主导花色素苷组分的洗脱液，将洗脱液于30℃下真空浓缩干燥得到花色素苷单体。