用于检测NK细胞活性的试剂盒

摘要

本发明提供了一种用于检测NK细胞活性的试剂盒。试剂盒包括PBS缓冲液、淋巴细胞分离液、RPMI1640培养液、荧光染料EGFP、抗体7-AAD-percp-cy5.5、荧光染料的载体pEGFP-N1质粒。本发明还提供了一种采用本试剂盒用于检测NK细胞的方法。本方法能节约检测时间和检测成本，且灵敏度高。

主权项

一种用于检测NK细胞活性的方法，包括步骤：(1)取3ml肝素钠抗凝的外周血与PBS缓冲液按照1:1稀释，将稀释后的标本缓慢注入具有2ml淋巴细胞分离液的10ml离心管中，以665g转速离心20min，吸取中间白细胞层；采用PBS清洗2次，然后以393g转速离心10min，去上清液；将500μl RPMI1640培养液加入离心得到的沉淀中，混匀，得到单个核细胞PBMNC，浓度调节为1*106/ml备用；取对数期的K562‑EGFP细胞用PBS洗2次，然后以393g转速离心10min，去上清液，加500μl RPMI1640培养液混匀，放室温静置1h，浓度调节为1*105/ml备用；(2)将100μl K562‑EGFP加入对照管中；将100μl PBMNC+100μl K562‑EGFP加入检测管中；然后将对照管与检测管均放入5％CO2培养箱中孵育2h；(3)将5.520μl抗体7‑AAD‑percp‑cy5.5加入对照管与检测管中，充分混匀，静置1分钟，然后采用流式细胞仪检测细胞活性，在检测时，对照管与检测管中细胞的流速限制在200‑800个/s，收集P1门内细胞至少10000个。