一种富油新绿藻的遗传转化方法

摘要

本发明公开了一种富油新绿藻的遗传转化方法，包括如下步骤：S1.携带双元表达载体农杆菌准备；S2.富油新绿藻细胞的准备；S3.共培养：将S1保存的农杆菌转移到液体培养基中培养到对数生长期，将得到的农杆菌细胞与S2得到的藻细胞混合培养；S4.转化子筛选：收集S3共培养后的细胞，再用液体培养基将藻细胞制成细胞悬液，涂布于含潮霉素的筛选平板上，连续光照培养直到长出藻落，计数平板上长出的藻落数，挑取长出的藻落转移保存、检测。本发明对一种新的宿主富油新绿藻实现了转基因操作，对各步骤参数进行了优化限定，为富油新绿藻的基因工程操作开辟了道路。

主权项

一种富油新绿藻的遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：S1. 携带双元表达载体农杆菌准备：将重组的pCAMBIA1301质粒转入感受态农杆菌中，再将转化后的农杆菌涂布于培养平板上培养，挑选出成功转入了质粒的农杆菌，转移到固体培养基保存；S2. 富油新绿藻（Neochloris oleoabundans）细胞的准备：培养富油新绿藻细胞到对数生长期，离心，得到藻细胞，用于共培养；S3. 共培养：将S1保存的农杆菌转移到液体培养基中培养到对数生长期，将得到的农杆菌细胞与S2得到的藻细胞混合培养；S4. 转化子筛选：收集S3共培养后的细胞，再用液体培养基将藻细胞制成细胞悬液，涂布于含潮霉素的筛选平板上，连续光照培养直到长出藻落，计数平板上长出的藻落数，挑取长出的藻落转移保存、检测；其中，S1所述重组的pCAMBIA1301质粒包含Hsp70A‑RBCS2启动子+GUS基因+RBCS2终止子的表达盒和CaMV35s启动子+ hygromycin基因+ CaMV35s poly A终止子的表达盒。