一种测定石斛生物碱含量的方法

摘要

本发明公开了一种测定石斛生物碱含量的方法，石斛干品粉碎后，用碱性氯仿水浴回流提取生物碱，测定液中添加非离子表面活性剂吐温-80，溴甲酚绿酸性染料比色法测定石斛生物碱含量。本发明在石斛生物碱测定体系中，添加适量的吐温-80，使溴甲酚绿-氯仿萃取效率提高，提高了石斛生物碱测定的灵敏度，并能快速分层，操作简便，重现性好，测定结果稳定。

主权项

一种测定石斛生物碱含量的方法，其特征在于，以石斛干品为原料，包括以下步骤：(1)将石斛干品磨成粉末得物质A；(2)取物质A0.2g，用10～15重量倍体积浓度为25‑28％的浓氨水润湿后于圆底烧瓶中密塞40min，加氯仿10mL，称重，圆底烧瓶接入冷凝管，置80℃水浴中加热回流2h，冷却后补充氯仿至原重，定性滤纸过滤，得续滤液B；(3)将步骤(2)获得的续滤液B加氯仿定容至10mL，加入pH4.5的邻苯二甲酸氢钾‑氢氧化钠缓冲液5mL和体积浓度0.04％溴甲酚绿溶液1mL，并添加体积比1:60的吐温‑80水溶液0.4mL，在振荡器上振摇3min，静置10min，过滤氯仿层，得续滤液C；所述邻苯二甲酸氢钾‑氢氧化钠缓冲液中邻苯二甲酸氢钾和氢氧化钠浓度均为0.2M；(4)将步骤(3)获得的续滤液C加0.01mol/L氢氧化钠‑无水乙醇溶液1mL，摇匀，于620nm波长处测定吸光度；生物碱含量计算公式如下：上述公式中，生物碱标品为石斛碱，生物碱标品重20μg,生物碱标品吸光度为0.174。