一种海洋弹性蛋白酶myroilysin在制备无细胞真皮基质中的应用

摘要

本发明涉及一种海洋弹性蛋白酶myroilysin在制备无细胞真皮基质中的应用，包括如下步骤：（1）将经过活化的深海细菌D25菌株发酵培养后，离心，取上清液，加入硫酸铵，收集沉淀，经重溶、透析后离心，再经离子交换层析分离纯化，制得弹性蛋白酶myroilysin；（2）将弹性蛋白酶myroilysin溶于Tris-HCl缓冲液中，配成酶液；（3）将去除脂肪层和表皮的猪皮浸入酶液中，处理后取出，洗涤，制得猪皮无细胞真皮基质。本发明所述的海洋来源弹性蛋白酶myroilysin脱细胞和去除弹性蛋白的效率高，速度快，用量小；制备获得的无细胞真皮基质的孔径大，空隙率高，有利于组织工程中细胞的进入和增殖，在组织工程中具有广泛的用途。

主权项

一种海洋来源的弹性蛋白酶myroilysin在制备无细胞真皮基质中的应用，其特征在于，包括如下步骤：（1）将经过活化的中国典型培养物保藏中心保藏号 CCTCC M2012534的深海细菌（Myroides profundi）D25菌株接种于液体发酵培养基中发酵培养后，将培养物离心，取上清液，向上清液中加入硫酸铵至硫酸铵饱和度为55%，收集沉淀，经Tris‑HCl重溶、透析后离心，再经离子交换层析分离纯化，制得弹性蛋白酶myroilysin；（2）将步骤（1）制得的弹性蛋白酶myroilysin溶于Tris‑HCl缓冲液中，配成酶浓度为0.1 mg/mL的酶液；（3）将去除脂肪层和表皮的猪皮浸入步骤（2）制得的酶液中，处理24 小时后取出，置于蒸馏水中洗涤24小时，制得猪皮无细胞真皮基质。