发明名称 |
一种延胡索快速鉴别方法 |
摘要 |
本发明公开了一种延胡索快速鉴别方法,通过针对延胡索的一对特征引物,对延胡索进行快速鉴别,该方法包括以下步骤和条件:(1)将收集的各批供试药材取总DNA;(2)取特征引物P2,P4加无菌水稀释;(3)通过PCR反应程序获得扩增产物;(4)扩增产物与6×Loading buffer混匀后点于琼脂糖凝胶上,置于紫外灯下观察,拍照并保存;(5)照片中显示正品延胡索在200~300bp之间有一条清晰条带,其他伪品在该位置均无条带,阴性无干扰。本发明方法属于快速测定方法,基于PCR技术鉴别延胡索,方法简单、准确,灵敏度高,取样量少、稳定性好、检测速度快、特异性强,非常有利于在制药过程中延胡索药材快速质量控制中的应用。 |
申请公布号 |
CN105624305A |
申请公布日期 |
2016.06.01 |
申请号 |
CN201610091330.5 |
申请日期 |
2016.02.18 |
申请人 |
广东省第二中医院(广东省中医药工程技术研究院) |
发明人 |
孙冬梅;毕晓黎;罗文汇;胥爱丽;陈昭;陈伟韬;李养学;李素梅;江洁怡;许灿新 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
广东莞信律师事务所 44332 |
代理人 |
余伦 |
主权项 |
一种延胡索快速鉴别方法,其特征在于,通过针对延胡索的一对特征引物的聚合酶链式反应,对延胡索进行快速鉴别,该方法包括以下步骤和条件:(1)将收集的各批供试药材,经乙醇擦拭表面,晾干,用液氮冷冻研磨成粉末,取研碎后的粉末60mg,用DNeasy Plant Mini Kit DNA提取试剂盒提取试剂盒提取总DNA,备用;(2)取特征引物P2,P4加无菌水稀释成10μmol/μL,备用;(3)PCR扩增:50μl体系中含有浓度为10μmol的P2、P4上下游引物各1μL,模版DNA2μL,Prime STAR HS聚合酶预混体系25μL,剩余体积用无菌蒸馏水补足;通过PCR反应程序获得扩增产物;(4)取步骤(3)扩增产物5μL,与6×Loading buffer 1.0μL混匀后点于1.5%琼脂糖凝胶上,用1×TAE电泳缓冲液在110V电压恒压电泳20min;取出凝胶,置于紫外灯下观察,并用CAMAG成像系统拍照并保存;(5)步骤(4)所得照片中显示,正品延胡索在200~300bp之间有一条清晰条带,其他伪品在该位置均无条带,阴性无干扰。 |
地址 |
510095 广东省广州市越秀区恒福路60号 |