一种双向梯度血管内皮生长因子的神经导管制备方法

摘要

本发明公开了一种双向梯度血管内皮生长因子(VEGF)的神经导管制备方法，该制备方法包括静电纺丝(聚己内酯)PCL导管的制备、PCL导管双向梯度氨解、肝素偶联反应制备双向梯度的肝素化导管和双向梯度VEGF导管制备。本发明的PCL导管双向氨解装置得到部-NH2密度高，向两端-NH2密度逐渐减低的梯度导管，本发明提供的双向梯度的VEGF功能化的神经导管，其所负载的VEGF量高，而两端所负载的VEGF量相对较少，能够通过趋化作用引起受损神经两端的内皮细胞向导管高浓度处迁移，加速神经导管由两端向方向性血管化，同时生成的血管能够作为支架引导雪旺细胞快速迁移进入神经导管，从而促进神经的再生。

主权项

一种双向梯度血管内皮生长因子的神经导管制备方法，其特征在于，该双向梯度血管内皮生长因子的神经导管制备方法包括以下步骤：步骤一，静电纺丝PCL导管的制备：将PCL溶于10％的甲醇/氯仿的混合溶液制备静电纺丝溶液，通过微量注射泵控制电纺溶液的流速，静电纺丝装置两极间电压设定为20kV，注射器和接收器之间的距离为15cm，应用21‑G针形喷嘴，接收器为直径1.5mm的钢棒，制备PCL导管，在真空干燥箱中干燥，除去残余溶剂，得到PCL导管；步骤二，PCL导管双向梯度氨解：将PCL导管用细铁丝穿过，弯曲对折垂直放入2ml EP管中，加入200ul，0.1M的乙二胺溶液，反应5min‑20min，然后微量注射泵以1ml/h‑3ml/h速度向EP管中加入蒸馏水，当浸没导管后停止加水，继续反应5min‑10min；之后用PBS洗去未反应的乙二胺；得到中央部‑NH2密度高，向两端‑NH2密度逐渐减低的梯度导管；步骤三，肝素偶联反应制备双向梯度的肝素化导管：将步骤二所得具有双向梯度‑NH2的PCL导管放入吗啉乙磺酸缓冲体30min，移除吗啉乙磺酸，加入1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺/N‑羟基丁二酰亚胺/肝素溶液，避光脱色摇床过夜，将肝素共价结合到携带氨基的导管上，PBS洗去未结合的肝素，超净台晾干，制得具有双向梯度的肝素化导管；步骤四，双向梯度VEGF导管制备：双向梯度的肝素化导管，放入2mlEP管中，加入2ml 100ng/ml的VEGF溶液，4℃浸泡过夜，吸出VEGF溶液，加入PBS溶液润洗，超净台晾干，制得具有双向梯度的VEGF功能化的导管。