一种生物法制备高纯度叶黄素晶体的方法

摘要

本发明公开了一种生物法制备高纯度叶黄素晶体的方法，属于叶黄素领域。本发明从万寿菊中提取得到叶黄素粗品，再用生物发酵法对其进行提纯，得到高纯度叶黄素晶体，本发明采用的生物法选择性高，催化效果好，而且条件温和，工艺简单，制备过程中产生的溶剂残留量小，对环境污染小，制备得到的产品的纯度高，成本低，具有广泛的应用前景。

主权项

一种生物法制备高纯度叶黄素晶体的方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）称取100～200g干燥粉碎后的万寿菊粉末，按固液比1：20与石油醚混合，并在300～400W功率和30～35℃下进行超声提取25～30min，提取后过滤，并将滤液真空浓缩回收石油醚溶剂，得到叶黄素酯浸膏；（2）将上述叶黄素酯浸膏按固液比1：10溶解在石油醚中，并加入总体积30～50%浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液进行皂化反应1～2h，反应完成后抽滤，将滤液用质量分数20%盐酸调节pH值为7.0，将调节后的滤液在45～55℃下蒸馏2～3h，蒸馏完成后冷却至室温，并放入0～5℃的冰水中静置20～30min，静置后快速抽滤，得到叶黄素粗品；（3）分别选取3～5g磷酸氢二钾，3～5g磷酸二氢钾，2～4g硫酸镁，0.3～0.5g氯化钠和0.3～0.5h二水氯化钙加入到250mL的容量瓶中，加入去离子水定容到刻度线，摇晃均匀，得培养液；（4）从上述容量瓶中取出150～170mL培养液，并用质量分数5%硝酸调节其pH值为7.0，将调节后的溶液和8～10g牛肉膏、5～7g蛋白胨和4.5～5.5g步骤（2）叶黄素粗品混合，得固体培养基，混合后均匀将其铺平板上；（5）在上述铺平板中，分别接种5～10株黑曲霉菌、8～12株糙皮侧耳菌和3～5株青霉菌，在25～30℃下摇床发酵64～70h，发酵结束后离心分离，得上清液，将得到后的上清液在50～60℃下减压蒸馏1～2h，蒸馏完成后冷却至室温，并放入0～5℃的冰水中静置20～30min，静置后快速抽滤，得到高纯度叶黄素晶体，并置于60℃的烘箱中干燥10～12h，干燥后收集即可。