γ-聚谷氨酸的制备方法及护手霜和护手霜的制备方法

摘要

一种γ-聚谷氨酸的制备方法中，采用地衣芽孢杆菌CGMCC NO.3336，经菌种活化、种子液制备、发酵罐发酵和聚谷氨酸提取后获得γ-聚谷氨酸，制备聚谷氨酸的工艺流程简单，能够大幅度的减少生产成本，同时也能减少聚谷氨酸的损失率，使得聚谷氨酸的最后产率提高；另外，该方法能够获得高分子量的聚谷氨酸，对于后续制作的护手霜更为有利。一种护手霜和护手霜制备方法中，在护手霜制备过程中添加γ-聚谷氨酸生物高分子材料，聚谷氨酸降解后无毒，可生物降解，对皮肤有营养作用。聚谷氨酸可以针对各种不同肤质的皮肤进行保水保湿，可以提供比透明质酸（HA）更好的保湿效果。

主权项

一种γ‑聚谷氨酸的制备方法，采用菌株为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis，该菌株已于2009年10月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.3336；具体包括以下步骤：(1)菌种活化：将地衣芽孢杆菌CGMCC NO.3336原始菌株接种在斜面培养基上，于37℃培养16小时，如此活化2‑3次，制备成熟的斜面种子；(2)种子液的制备：将活化后的斜面种子接种于装有50ml液体培养基的500ml三角瓶中，37℃，220rpm培养16小时至对数生长期；所述种子培养基组成为：葡萄糖30g/L，酵母膏7g/L，胰蛋白胨10g/L，K₂HPO₄0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，pH7.2，其余为水；(3)发酵罐发酵：将步骤(2)中的种子液以5％的接种量接种于发酵罐，30L发酵罐发酵培养基装液量为15L，初始发酵温度38‑40℃，罐压0.01‑0.05Mpa通风量0.5‑1.0vvm，转速400‑600rpm；当发酵液OD₆₆₀在0.550‑0.600时，并控制发酵温度30‑35℃，调节转速至200‑350rpm，通风量1.5‑2.0vvm，控制pH在7.2‑7.5至发酵结束前2‑6小时；所述发酵培养基组分为：葡萄糖80g/L，氯化钠10g/L，MgSO₄·7H₂O1g/L，无水氯化钙1g/L，FeSO₄·7H₂O 0.02g/L，KCl 0.5g/L，精氨酸0.8g/L，组氨酸0.5g/L，苏氨酸0.5g/L，甲硫氨酸0.4g/L，谷氨酰胺0.5g/L，胆碱0.31g/L，吡哆醇0.001g/L，其余为水；(4)聚谷氨酸的提取：发酵结束后离心去菌体，然后用5倍上清液体积的乙醇，醇沉析出聚谷氨酸，然后在复溶于上清液体积的蒸馏水，利用喷雾干燥方法制备出干粉聚谷氨酸。同时将上清液用流动相稀释数倍至γ‑聚谷氨酸的含量在1‑3g/L，通过高效液相对其分子量进行检测，分子量在20万到200万道尔顿。