一种从红斑狼疮病人外周血中分离无自身抗原的单个核细胞的方法

摘要

一种从红斑狼疮病人外周血在中分离无自身抗原的单个核细胞的方法，包括以下步骤：(1)从红斑狼疮患者的非发病期采集100ml外周静脉血；(2)血液中分离得到单个核细胞：对抗凝处理后的血液进行离心，离心后，得到上层血浆层和下层血细胞层吸掉上层血浆；(3)用混合酶消化液除去残留抗原，净化单个核细胞。本发明设计蛋白酶和DNA酶混合消化步骤，去除残余红斑狼疮有毒物质。

主权项

一种从红斑狼疮病人外周血中分离无自身抗原的单个核细胞的方法，其特征是，包括以下步骤：(1)从红斑狼疮患者的非发病期采集100ml外周静脉血针对红斑狼疮患者，在患者病情稳定期无症状时，使用医疗采血技术采取100ml血液到采血袋中，如果是初次患者，立即采血或者在症状稳定后，使用医疗采血技术采取100ml血液到采血袋中，采血后的采血袋放入4℃环境中运输，2h内使用；(2)血液中分离得到单个核细胞1)取100ml抗凝处理后的血液，将血液分别加入到4个50ml无菌离心管中；2)对抗凝处理后的血液进行离心，离心后，得到上层血浆层和下层血细胞层吸掉上层血浆；3)向该4个下层含血细胞的离心管中加入注射用生理盐水，用移液器混匀；4)再取4支含有淋巴细胞分离液的离心管，缓慢的将血细胞混合液用移液器转移到淋巴细胞分离液的上层；5)进行离心；6)离心后将中间白膜层吸入到新的离心管中；7)用注射用生理盐水补液后，再次进行离心，清洗单个核细胞；8)重新加入注射用生理盐水，混匀后离心清洗单个核细胞；(3)用混合酶消化液除去残留抗原，净化单个核细胞，所述混合酶消化液有两种，第一种为胰酶和胶原酶Ⅲ的混合液，第二种为DNA酶；1)准备0.25％的胰酶和0.1％的胶原酶Ⅲ的混合消化液，加入到上一步中剩下的细胞中，吹匀，消化一段时间后，加入注射用生理盐水，混匀后，进行离心；2)准备4％的DNA酶液，消化上一步剩下的细胞，再加入注射用生理盐水，进行离心清洗细胞；3)最后得到的即无自身抗原的单个核细胞，用无血清培养液培养。