一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A₁连用对大豆毛油进行脱胶的方法

摘要

本发明是一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A₁连用对大豆毛油进行脱胶的方法。利用PLC能特异性水解磷酸基与甘油基之间的磷氧键，生成甘油二酯并且可以提高油脂得率这一特点，先采用PLC进行酶法脱胶操作，而后利用PLA₁去除毛油中的非水化磷脂。考察PLC和PLA₁的加入时间，加入量以及反应温度、pH等。在最佳条件下测得脱胶油中的磷含量为8.3mg/kg。

主权项

一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A₁连用对大豆毛油进行脱胶的方法，通过以下步骤实现：步骤一：PLC和PLA₁的磁性固定化：首先将1g的Fe₃O₄/SiOx‑g‑P(GMA)复合粒子置于50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH 6.5)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)洗涤得到固定化PLC，将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存；将1g的Fe₃O₄/SiOx‑g‑P(GMA)纳米复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)洗涤得到固定化PLA₁，将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存；步骤二：磁性固定化PLC和磁性固定化PLA₁连用脱胶：准确称取300g大豆毛油，水浴加热到85℃，加入一定量的质量分数为45％(w/w)柠檬酸缓冲溶剂，在该温度下200r/min搅拌维持20min，充分搅拌混匀，然后进行冷却，将处理后的油和2.5％的蒸馏水加入500mL反应器中，调节至一定温度，再将油样中加入缓冲溶液调到pH为6.0～8.0，添加一定量的磁性固定化PLC，PLC在磁性固定化酶添加量0.4～1.2g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节反应温度至45～65℃，酶解反应2.0～2.8h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLC分离出来；然后加入一定量的磁性固定化PLA₁，PLA₁在磁性固定化酶添加量0.06～0.14g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节pH为5.5～7.5反应温度至40～60℃，酶解反应1.5～3.5h，反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLA₁分离出来；步骤三：磷含量测定。