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一种野生蝉花液体菌种人工培养的优化方法，其特征在于包括如下步骤：(1)优化液体培养基的配方：可溶性淀粉20g，奶粉10g,磷酸二氢钾0.5g,硫酸镁1g,维生素B12 10片，水1000mL，pH 5.0‑6.0；(2)优化液体培养基的配制：按照步骤(1)中的配方准确称量各药品，以配制1000mL培养基为例，量取1000mL的水用电磁炉烧开，然后按照易溶到不易溶的顺序依次将药品加入水中，用玻璃棒搅拌直至溶解；将配制好的培养基分装到500ml的三角瓶中，每个三角瓶装150ml,分装时避免培养基粘在三角瓶口壁上，如粘上则用纱布擦干净否则易滋生杂菌；用封口膜封口，并贴上标签；放在高压灭菌锅内灭菌，在压力为0.1‑0.2MPa，温度为121℃下，灭菌40min,待其压力降至零时，打开压力锅盖取出三角瓶放置冷却备用；(3)接种：将已灭过菌的三角瓶、接种工具、酒精棉球、酒精灯、接种环等放人超净工作台中，开启紫外线灯照射30min，用70％的酒精对菌种培养皿进行消毒，操作人员的手带无粉乳胶手套并用70％酒精消毒；点燃酒精灯，在酒精灯火焰无菌区范围内，将接种针和打孔器在酒精灯火焰上灼烧消毒，用打孔器在蝉花平板菌种表面进行打孔，打孔时沿菌落最外缘向中间逐次打，边缘的菌丝生长能力比较旺盛；用消毒过的接种针挑1个菌饼块，沿着三角瓶封口薄膜一侧揭开一条缝，通过酒精灯火焰的无菌区，将菌饼块掉入三角瓶内，每个三角瓶内接2块的菌饼块；放菌饼块的时候不要接触到瓶壁，避免污染；(4)培养：接种后将三角瓶移至19℃的恒温振荡摇床中静止培养24h，后在恒温19℃，转速为120r/min的恒温振荡摇床继续培养6‑7天。 |
