金属离子传感器和检测金属离子的方法

摘要

一种构建金属离子结合基序的方法，其通过以下进行：鉴定特异性结合金属离子的金属离子结合肽，确定编码金属离子结合肽的核酸序列的至少一部分，将编码金属离子结合肽的核酸序列修剪成金属离子结合位点，鉴定宿主蛋白和宿主蛋白的核酸序列的相关部分，将编码金属离子结合肽的修剪的核酸序列与宿主蛋白核酸序列可操作地连接成金属离子结合基序序列，并表达金属离子结合基序序列，其中修剪编码金属离子结合肽的核酸序列以便获得具有对金属离子的所需特异性的金属离子结合基序。另外，由根据该方法构建的金属离子结合基序序列编码的蛋白质。

主权项

一种多肽金属离子传感器，所述多肽金属离子传感器包含具有异源金属离子结合位点的工程化红色荧光多肽(RFP)，所述异源金属离子结合位点包括多个带负电荷的残基，所述多个带负电荷的残基在结合至其的金属离子的存在下包括五角双锥几何学取向的多个羧基氧，并且其中所述金属离子结合位点与所述工程化RFP的发色团区域协作相互作用，使得当所述传感器不具有结合至其的金属离子时它发出第一荧光信号，并且当所述传感器具有结合至其的金属离子时它发出第二荧光信号，其中所述第一荧光信号和所述第二荧光信号是可区分地可检测的，并且其中所述金属离子传感器具有至少10s^‑1的对所述金属离子的k_off值。