一种从野生过山蕨里提取总黄酮的工艺方法

摘要

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生过山蕨里提取总黄酮的方法，特别是涉及一种利用酶法提取，高速逆流色谱分离纯化总黄酮的新方法。本发明优点：本发明提取快捷、迅速，所得产品纯度高，环境污染小。1、应用生物酶解技术，使细胞内有效成分充分溶出。2、采用高速逆流色谱技术分离过程简单、溶剂消耗量少，在短时间内实现有效成分的快速分离，且纯度高。本发明利用生物酶法，促使有效成分充分溶出，乙醇回流提取，再采用高速逆流色谱分离纯化，所得总黄酮纯度提高到95.3％。

主权项

一种采用酶法提取并与高速逆流色谱藕联，最终得到过山蕨总黄酮的方法，其步骤如下：(1)酶解：过山蕨干燥全草粉碎至20‑40目，酶浓度0.2‑0.3mg/ml，酶解温度45‑50℃，酶解时间2‑3h；(2)回流提取：加入60‑70％乙醇，采用加热回流提取法，料液比1:12‑15，提取温度80‑90℃，提取两次，每次提取时间1‑1.5h；(3)收集：回收乙醇，薄层层析检测分析，收集总黄酮部分；(4)过滤：过滤，合并两次滤液，得总黄酮粗提物；(5)分相：称取一定克数总黄酮粗提物，选择HSCCC溶剂系统按其比例分别将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相；(6)取适量总黄酮粗提物溶于一定量的下相溶液中，震荡使完全溶解，备用；(7)HSCCC分离：以一定流速将溶剂的上相和下相以一定比例泵入HSCCC螺旋管，调整转速为800r/min，以2‑3ml/min的流速泵入流动相，紫外检测器检测流出物；(8)收集各色谱组分，将HSCCC分离得到的流分挥干，得含量为90％以上的总黄酮；其中，在所述的步骤(5)中，HSCCC溶剂系统为正己烷‑醋酸乙酯‑甲醇‑水或氯仿‑甲醇‑水‑醋酸或正己烷‑醋酸乙酯‑正丁醇‑甲醇的一种。