一种使用病毒诱导的基因沉默系统培育雄性不育植株的方法

摘要

本发明提供了VIGS载体系统在培育双子叶雄性不育植株中的应用。本发明建立了一个基于VIGS技术的高效实用的植物不育株系创建技术体系，不育率超过了96%，可达到98%，且具有不稳定遗传的特点，不会在后代中遗传，不会发生因不可控生物技术扩散而引起的基因污染或生物安全。同时，本发明操作简单，时间短，田间工作量少，大大节约成本，提高育种效率。

主权项

一种VIGS载体系统培育双子叶雄性不育植株的方法，其特征在于：所述VIGS载体系统来源于烟草脆裂病毒，所述双子叶植物为油菜，所述方法包括以下步骤：（1）克隆COI1基因片段，构建携带COI1基因的重组pTRV2‑COI1病毒载体，所述COI1基因片段为SEQ ID NO.1的<1181>～<1694>；所述pTRV2载体包括以下结构：依次为左边界（LB）、2×35S启动子、2×35S启动子驱动表达的烟草脆裂病毒外壳蛋白（CP）、可插入目的基因的多克隆位点（MCS）、自主剪切核酶（Rz）、转录终止子（NOS_t）、右边界（RB）；（2）将pTRV2‑COI1和pTRV1载体导入农杆菌GV3101，将分别含有pTRV2‑COI1和pTRV1载体的农杆菌GV3101按1：1的比例配制成OD600为0.6～1.0的菌液；所述pTRV1载体包括以下结构：依次为左边界（LB）、2×35S启动子、2×35S启动子驱动表达的烟草脆裂病毒RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）、运动蛋白（MP）、富半胱氨酸16K蛋白、自主剪切核酶（Rz）、转录终止子（NOS_t）、右边界（RB）；（3）切除植株的部分根须后，将根部浸入步骤（2）的菌液中；（4）取出侵染后的植株，经培育，最终表现为不育性状。