筛选靶向结核杆菌细胞壁核心合成与组装的药物的方法

摘要

本发明涉及一种筛选靶向结核杆菌的药物的方法，更具体而言涉及一种筛选靶向结核杆菌细胞壁的药物的方法。本发明采用谷氨酸棒杆菌为检定菌，以BHI和BHIS培养基为筛选介质，建立靶向结核杆菌细胞壁核心的合成与组装的筛选模型，从微生物代谢产物及其他来源的样品中筛选作用于结核杆菌细胞壁核心的合成与组装过程中不同酶系、不同靶点的新型抗结核药物和先导化合物。通过本发明的筛选模型可以筛选到靶向结核杆菌细胞壁核心的合成与装配全过程的抗结核药物，该模型是一个细胞水平的高通量筛选模型。

主权项

一种筛选靶向结核杆菌细胞壁合成与组装的药物的方法，其包括在无渗透压维持剂存在的情况下，将检定菌和候选化合物接触，并测定对所述细菌的抑制，所述抑制包括对鉴定菌的生长、繁殖的速度的抑制；以及在有渗透压维持剂存在的情况下，将检定菌和候选化合物接触，并测定对所述细菌的抑制，其中选择在有渗透压维持剂情况下，不抑制检定菌，而在无渗透压维持剂情况下抑制检定菌的候选化合物；其中所述检定菌是野生型谷氨酸棒杆菌；。其中所述渗透压维持剂是山梨醇；其还包括阳性对照实验，其中使用的阳性对照化合物是乙胺丁醇；其包括分别将野生型谷氨酸棒杆菌培养在含候选化合物的培养基中，所述培养基分别是BHI和BHIS培养基或其相应固体培养基；其还包括筛选后的候选化合物对草分枝杆菌、耻垢分枝杆菌或结核分枝杆菌的生长抑制的验证实验；其中采用多孔板法或纸片法测定所述细菌的抑制，其中所述多孔板是96孔板；其中所述96孔板法中，乙胺丁醇的浓度为1μg/ml，在37℃，培养12h后，用酶标仪测定544nm处的吸收，按照如下公式分别计算抑制率，抑制率差为将BHI培养基中的抑制率减去BHIS培养集中的抑制率作为抑制率差表示活性差异，其中抑制率差大于10％的待筛样品为阳性药物；其中所述纸片法中，使用所述固体培养基，乙胺丁醇的浓度为100μg/ml，在37℃，培养16h后，将BHI的抑菌圈直径减去BHIS的抑菌圈直径作为抑菌圈直径差，再将这个直径差除以BHI培养基中的抑菌圈直径得到比值，对所得的比值进行评价，其中比值大于12％的待筛样品为阳性药物；96孔板法中，当乙胺丁醇的抑制率差大于50％；纸片法中，当乙胺丁醇的抑菌圈直径的差大于9mm，认为筛选结果可信。