一种利用定点突变技术制备人类基因短串联重复序列等位基因分型标准物的方法

摘要

本发明公开了一种利用定点突变技术制备人类基因短串联重复序列等位基因分型标准物的方法，目前已知的STR基因座的分型是公开的，本发明根据STR基因座的不同分型设计同源臂引物，利用定点突变的方法，获得一个基因座的不同分型，然后将获得的不同基因座分型克隆到质粒中，免去了前期样本筛查的工作，提高了STR标准物制作的效率。

主权项

一种利用定点突变技术制备人类基因短串联重复序列等位基因分型标准物的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1根据目的STR基因座的序列设计扩增引物，以任一个体人类DNA为模板进行扩增；S2将得到的扩增产物克隆进质粒载体，然后转化到DH5α感受态细胞中，铺板培养；S3挑取单克隆进行测序，测序结果通过与原序列进行比对，保存测序正确的重组质粒；S4在目的STR基因座重复区设计同源臂引物作为定点突变引物，并以步骤S3获得的重组质粒为定点突变模板，进行PCR扩增；S5向步骤S4的PCR产物中加入DpnI酶进行孵育，消化掉模板质粒；S6向步骤S5得到的产物中加入重组酶进行孵育；S7将步骤S6的产物转化到DH5α感受态细胞中，铺板培养；S8从步骤S7的产物中挑取单克隆进行测序，根据测序结果，选择需要的STR分型，并将相应的重组质粒DNA作为模板进行PCR扩增，得到需要的等位基因分型标准物。