基于脂肪酸碳稳定同位素的水产品产地溯源方法

摘要

本发明涉及基于脂肪酸碳稳定同位素的水产品产地溯源方法，步骤为：A、前处理：将收集到的水产品处理后冷冻完全，干燥，磨成粉末状；B、总脂提取：取样品5.0g，加入氯仿-甲醇溶液，振荡抽提后浸提过夜，过滤，抽提液用氯化钠溶液洗涤，静置分层，收集氯仿层，经无水硫酸钠干燥后，通过氮吹法浓缩获得样品总脂；C、脂肪酸甲酯化：采用硫酸-甲醇甲酯化法，取总脂加入硫酸-甲醇溶液，于水浴甲酯化，冷却后加入正己烷后振荡，静置分层，取上清液放入瓶中冷藏保存；D、脂肪酸C稳定同位素测定：脂肪酸甲酯样品经气相色谱质谱联用仪分析鉴定，E、结果分析：通过比较不同海域样品间的脂肪酸的鉴别不同海域不同种类的水产品。

主权项

基于脂肪酸碳稳定同位素的水产品产地溯源方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：A、前处理：将收集到的水产品去肠，留取肌肉部分，‑20℃冷冻完全，盛放于无稳定同位素干扰的器具中进行冷冻干燥，再用无稳定同位素干扰的器具将干燥样品研磨成粉末状；所述的无稳定同位素干扰的器具为由玻璃或陶瓷材质的器具；所述冷冻干燥温度为‑60～‑50℃，冷冻干燥时间以样品完全干燥为止；B、总脂提取：取样品5.0g，加入100ml氯仿‑甲醇(2:1，v/v)溶液，37℃振荡抽提30min后浸提过夜，过滤，抽提液用1/5体积的0.88％氯化钠溶液洗涤，静置分层，收集氯仿层，经无水硫酸钠干燥后，通过氮吹法浓缩获得样品总脂；所述样品为水产品的干燥磨细样品；C、脂肪酸甲酯化：对总脂的脂肪酸甲酯化采用1％硫酸‑甲醇甲酯化法，取总脂20mg，加入1ml 1％硫酸‑甲醇溶液，于60℃水浴甲酯化60min，冷却后加入正己烷1ml振荡30s，静置分层，取上清液放入样品瓶中4℃冷藏保存；D、脂肪酸碳稳定同位素测定：脂肪酸甲酯样品经气相色谱质谱联用仪进行分析鉴定，同时，经稳定同位素比质谱仪测定单分子脂肪酸的δ¹³C值，稳定碳同位素的自然丰度表示为：δX＝([R样品/R标准]－1)×10³式中：X代表¹³C；R代表¹³C/¹²C。δ¹³C值是相对于VPDB标准的自然丰度，分析精度δ¹³C＜0.20‰。；E、结果分析：对所获得的脂肪酸甲酯样品的GC保留时间和MS谱图与Supelco37‑FAME混标的GC保留时间和MS谱图的标准谱库相比较，确定脂肪酸种类，同时，结合IRMS所测得的脂肪酸的δ¹³C值，确定各脂肪酸组成的δ¹³C值，通过比较不同海域样品间的脂肪酸的δ¹³C值，找出δ¹³C值差异显著的脂肪酸种类，对差异最为显著的某种或者某些脂肪酸作为指标建立不同海域不同种类水产品的δ¹³C值指纹库，用于鉴别不同海域不同种类的水产品。