一种桑树品种亲缘关系DNA分子评鉴方法

摘要

本发明公开了一种桑树品种亲缘关系DNA分子评鉴方法，包括以下步骤：（1）桑树品种的系统发育分析；1）取材；2）筛选对比序列；3）桑树基因组DNA提取及纯度、浓度检测；4）PCR扩增；5）PCR检测；6）PCR测序；7）序列拼接、对比，鉴定进化关系；（2）桑树品种亲缘关系分析。本发明先进行系统发育分析，且从世界范围内分布桑种及变种合理取材，再进行桑树品种居群遗传多样性分析，进一步确定亲缘关系，通过两步骤分析方法的使用，显著提高了评鉴亲缘关系的准确性和可重复性，为保护桑树品种资源，进行桑树品种指纹鉴别，分子辅助育种、品种资源开发及利用有重大推动作用。

主权项

一种桑树品种亲缘关系DNA分子评鉴方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）桑树品种的系统发育分析：1）取材: 通过在世界范围内分布的桑种、变种及不同生态类型选材；2）筛选比对序列；3）桑树基因组DNA提取及浓度、纯度检测：经硅胶干燥处理后的桑树品种样本0.10—0.20g，通过4倍CTAB提取液提取获得桑树基因组DNA并进行浓度、纯度检测及复核；4）PCR扩增；5）PCR产物检测；6）PCR产物测序；7）序列拼接、比对，鉴定进化关系：测序结果用Sequencher4.1.4软件拼接，对少数误判碱基，根据碱基峰形更正，用Clustalx1.83c软件序列比对，并依据GenBank的核rDNA内转录间隔区ITS序列确定序列范围，用Bioedit软件除去两端非ITS部分，DNAstar软件分析各序列长度、G+C含量及变异位点，同源性及遗传分歧，用Modeltest V3.06和PAUP Version4.0b10软件进行碱基替换模型计算，基于模型用PAUPVersion4.0b10MP法或mrbayes软件分析系统进化关系；（2）桑树品种的亲缘关系分析：采用DNA分子标记方法对步骤7）获得的进化关系进行亲缘关系分析，获得分析结果。