无抗原胶原聚集体及其制备方法

摘要

本发明公开了无抗原胶原聚集体及其制备方法，其特点是以可溯源的动物皮或跟腱为原料，通过去肉、剥离筋膜、脱脂、除去杂蛋白以及脱细胞等工艺操作，对动物皮或跟腱进行高度纯化。接着应用酸蓬松化、匀浆、多次盐析、多次离心等手段对胶原聚集体进行分离纯化，最终得到一种无抗原胶原聚集体。这种胶原聚集体为胶原纤维、胶原纤维束的混合体，它具有周期性的明暗横纹结构，横纹间距大约为67nm。该材料既具有良好的生物相容性、可生物降解性、力学性能及止血性能，又具有低抗原性、生物活性等特点，可广泛地应用于止血材料、组织工程支架材料、生物敷料、可降解医用缝合线及整形材料等生物医学材料的制备。

主权项

一种无抗原胶原聚集体的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：A)动物皮或跟腱预处理：取新鲜可溯源的动物皮或跟腱，清除动物皮或跟腱表面的肌肉、边缘软骨、血管和筋膜组织，接着将其切成1.0～5.0mm×1.0～5.0mm的薄片，室温下用生理盐水浸泡30～90min，再用双蒸水反复漂洗；B)动物皮或跟腱脱脂处理：将10重量份的动物皮或跟腱的薄片放于超临界流体处理器内，加入200～400体积份的丙酮中，在压力10.0‑35.0MPa、室温的条件下处理1～5h，结束后用双蒸水反复漂洗直至动物皮或跟腱无丙酮气味；C)动物皮或跟腱除去非胶原成分、脱细胞处理：在超声波的条件下，将脱脂后的动物皮或跟腱浸泡在Tris‑NaCl缓冲溶液中，其中Tris浓度:0.05mol/L；NaCl浓度:1mol/L；pH＝7.5，室温搅拌10‑24h；接着将其放于‑80℃的速冻冰箱中反复冻融3～6次，双蒸水反复清洗；继续在超声波的条件下，将冻融后的动物皮或跟腱浸泡在1～1.5M NaCl，10～15mM EDTA的高渗溶液中，37℃下搅拌12～24h，接着将动物皮或跟腱继续浸泡在0.5～1％的十二烷基硫酸钠溶液中，室温下搅拌2～5h，用蒸馏水反复清洗，最后将动物皮或跟腱浸泡在0.1～0.5％的胰酶和0.1～0.5％的EDTA混合溶液中，37℃下搅拌消化1～3h，用双蒸水反复清洗，冷冻干燥获得纯化动物皮或跟腱；D)无抗原胶原聚集体的制备：取上述纯化动物皮或跟腱，将其浸渍2～10M醋酸溶液中2～14h，4～10℃恒温条件下用匀浆机匀浆20～30min，将浆液在15000～20000rpm下离心20～30min，除去上清液，收集浆液，调节浆液pH至7.0～7.5，加入最终浓度为1.5mol/L的氯化钠粉末，静置12～20h，接着再次在15000～20000rpm离心20～30min，除去上清液，最后以超纯水洗涤沉淀3～5次，最后经冷冻干燥、剂量为6～30KGy/h⁶⁰Co所产生的γ射线消毒灭菌，成型包装，得到无抗原胶原聚集体；所制得的无抗原胶原聚集体主要含有胶原纤维和胶原纤维束，其关键性能指标如下：外观：白色絮状，无肉眼可见之杂质；水分含量：≤20％(wt)；重金属含量：≤10μg/g；羟脯氨酸含量：不小于总蛋白含量的10％(w/w)；纤维长度:10‑20mm；断裂强度:≥4.0cN/tex；断裂伸长率:20～40％；细胞毒性：细胞毒性反应不大于1级；无菌试验：无菌；致敏试验：无迟发性超敏反应；皮内反应试验：原发性刺激指数PII<0.4。