一种土壤微生物定性与定量的检测方法

摘要

本发明公开了一种土壤微生物定性与定量的检测方法，属于生物技术领域。所述方法包括以下步骤：确定待测样品中的目标微生物类群、目标微生物和非目标生物、以及不存在于所述待测样品中的参考微生物；设计目标微生物类群与目标微生物的特征区域；设计特征区域的多重扩增引物；在待测样品中加入参考微生物与外源核酸后，提取待测样品中的微生物的核酸；利用设计的多重引物扩增微生物核酸，扩增获得特征测序片段；利用特征测序片段定性、定量分析待测样品中微生物。本发明不需要对微生物进行预培养与增殖，可以一次性地对待测样品中的多种已知微生物进行高通量、高准确度、高分辨率的检测，检测过程简单、快速且流程规范。

主权项

一种土壤微生物定性与定量的检测方法，其特征在于，所述方法包括：确定待测样品中的目标微生物类群、目标微生物和非目标生物、以及不存在于所述待测样品中的参考微生物，所述待测样品为土壤；根据所述目标微生物类群、所述目标微生物、所述参考微生物和所述非目标生物的参考基因组序列，获得所述目标微生物类群的特征区域、所述目标微生物的特征区域和所述参考微生物的特征区域；制备扩增所述目标微生物类群的特征区域的第一多重扩增引物、扩增所述目标微生物的特征区域的第二多重扩增引物和扩增所述参考微生物的特征区域的第三多重扩增引物，将所述第一多重扩增引物、所述第二多重扩增引物和所述第三多重扩增引物混合得到混合多重扩增引物；向所述待测样品中加入所述参考微生物和所述混合多重扩增引物不能扩增的外源核酸，获得混合样品；提取所述混合样品的核酸；利用所述混合多重扩增引物和所述混合样品的核酸进行扩增反应，获得扩增产物；利用所述扩增产物进行高通量测序，获得高通量测序片段；根据所述高通量测序片段，对所述目标微生物类群和所述目标微生物进行定性和定量分析。