一种用于核酸扩增的酵母样真菌总DNA快速提取方法

摘要

本发明涉及真菌分子生物学领域，具体是一种用于核酸扩增的酵母样真菌总DNA快速提取方法，所述方法将冻融法、化学裂解法、机械破壁法巧妙整合，在10到20分钟内完成DNA提取，是目前为止最快的廉价、无毒真菌DNA高效提取方法。本发明的提取方法具有快速、灵敏、无毒、便宜等优点，可适用于绝大部分酵母样真菌。

主权项

一种用于核酸扩增的酵母样真菌总DNA快速提取方法，其特征在于，包括以下步骤：A、在2ml EP管中加入150‑200mg酸洗玻璃微珠，加入真菌固体菌落；或在2ml EP管中加入150‑200mg酸洗玻璃微珠，加入菌液或者真菌感染组织液化标本，高速离心12000rpm/min 2分钟，移液器尽量吸取上清；B、加入300μl胍盐裂解液；C、金属浴105℃加热至裂解液温度到达70‑80℃；D、迅速放入液氮冷冻30秒；E、迅速放入金属浴105℃加热至裂解液温度到达40‑50℃；F、组织破碎仪55Hz破碎60秒；G、12000rpm/min离心一分钟；H、取200μl上清加入1.5ml EP管，加入20μl清洗液，充分混匀；I、加入560μl无水乙醇，轻柔混匀；J、取750μl混合液加入核酸吸附柱，10,000rpm/min离心一分钟，弃离心液；K、加入500μl洗脱液，10,000rpm/min离心一分钟，弃离心液；L、重复步骤K；M、核酸吸附柱10,000rpm/min空转2‑3分钟；N、将吸附柱从收集管中取出，放入新的1.5ml EP管，在离心柱吸附膜中心加入60μl双蒸水或者TE缓冲液；O、10,000rpm/min离心30秒收集DNA溶液。