桑黄菌中4-甲基-1，2-苯二酚的分离技术

摘要

本发明公开了一种桑黄菌（火木层孔菌Phellinus igniarius(L ex Fr) Quel、裂蹄木层孔菌 phellinus linteus (Berk et Curt) Teng、鲍氏层孔菌、哈蒂针层孔菌 Phellinus hartigii (Allesch et Schnabl) Imaz）中甲基苯二酚的分离技术。首先制备桑黄菌粗提物，然后是正相硅胶层析，使用氯仿与甲醇梯度洗脱，重复一次正相硅胶层析，接着进行氯仿甲醇凝胶层析，最后减压蒸干得到甲基苯二酚。

主权项

桑黄菌中甲基苯二酚的分离方法，其步骤顺序如下：(1)制备桑黄粗提物；(2)将步骤(1)中所得的桑黄粗提物与正相硅胶混匀搅拌，干燥后进行硅胶正相柱层析，用洗脱剂洗脱2‑5次，得到洗脱液；(3)将步骤(2)中最后一次洗脱液蒸干，等体积硅胶拌样，进行正相硅胶层析，用洗脱剂洗脱；(4)收集步骤(3)中的洗脱液，减压浓缩，使用氯仿：甲醇＝1:1溶解，甲醇凝胶柱层析，使用洗脱剂洗脱；(5)收集步骤(4)得到的洗脱液，使用TLC检测各洗脱液，适度合并洗脱液，减压干燥，即为甲基苯二酚；所述的合并的标准是将出现粉红色斑点的洗脱液合并；所述TLC检测中展开剂为石油醚：丙酮＝20:1‑40:1；所述桑黄粗提物，由下述方法制得：(a)发酵培养基配方以克/100毫升计是：玉米淀粉 1‑5％   葡萄糖 1‑5％蛋白胨 0.1‑0.5％ 酵母膏 0.1‑0.5％硫酸镁 0.1‑0.5％ 磷酸二氢钾 0.01‑0.05％(b)桑黄粗提物的发酵培养方法是，将桑黄菌种以常规方法接种到装有液体培养基的三角烧瓶内，以20～35℃温度，摇瓶转速为80～280r/min，pH 3～8条件下，震动培养7～15天；培养中当pH值降到2.5～4时，将摇瓶中的种子接种到50L发酵罐的培养液中，以温度20～35℃，发酵罐压力0.1～0.2公斤/平方厘米，pH 3～8，通气量0.5～1.1vvm，搅拌速度100～280转/分的条件，培养7～15天，即可利用桑黄菌丝体发酵全液制备桑黄粗提物；(c)取步骤(b)中所得桑黄菌丝体发酵全液，将其以常规方式减压浓缩，使其体积浓缩到原体积的1/2～1/5；(d)用体积百分比为60～95％的乙醇对上述步骤(c)浓缩后的发酵液进行提取，其中，加入乙醇的量是浓缩液体积的2～5倍，能够使提取液中乙醇浓度达到60～90％；(e)对步骤(d)所得提取液在50～70℃条件下，加热1～2小时；以常规方法进行分离，并通过二级过滤除去杂质，分离获得乙醇提取液；将上述乙醇提取液以常规方式减压浓缩，使其体积浓缩到原体积的1/5～1/10；(f)将步骤(e)所得的浓缩液以低温冷冻干燥的方法进行干燥，得桑黄粗提物；所述的甲基苯二酚为4‑甲基‑1,2‑苯二酚。