主权项 |
一种猪血清中猪胸膜肺炎放线杆菌的检测方法,其特征在于:步骤如下:⑴随机抽取规模场的仔猪及育肥猪血清样品;⑵间接血凝试验检测待检猪血清中的猪胸膜肺炎放线杆菌抗体①将猪胸膜肺炎放线杆菌间接血凝试剂盒中的阴阳性对照、抗原恢复室温;②在V型110度板上进行微量间接血凝试验,200倍倍比稀释血清,做阴阳性对照,加样处理好后放入36~38℃恒温箱中静置1.5h后观察判断结果,猪血清中检测到猪胸膜肺炎放线杆菌,检测结果即为阳性;⑶猪胸膜肺炎ELISA试剂盒检测待检猪胸膜肺炎放线杆菌抗体;①将试剂盒取出,盒内试剂恢复室温并充分摇匀;②将200倍稀释后的样本和对照加入板孔中,每孔51uL,阴阳性对照均为双份;③盖上膜,36~38℃维持55~65min;④去膜,用260uL的洗液清洗5次,最后一次在吸水纸上将平板拍干;⑤每孔加51uL酶标抗体;⑥重复步骤③;⑦重复步骤④;⑧加入51uL底物溶液,轻摇2.5秒;⑨将平板放入黑暗中在23℃作用20min;⑩加入51uL终止液,轻摇2.5s,12min内在405nm下读数并记录结果,判定标准根据试剂盒使用说明书判定,猪血清中检测到猪胸膜肺炎放线杆菌,检测结果即为阳性;⑷步骤⑴及步骤⑵的检测结果均为阳性,则猪血清中检测到猪胸膜肺炎放线杆菌。 |