一种利用高速逆流色谱分离纯化制备哈巴俄苷和斩龙剑苷A的方法

摘要

本发明公开了一种利用高速逆流色谱分离纯化制备哈巴俄苷和斩龙剑苷A的方法，将玄参药材粉碎、乙醇提取后，经大孔吸附树脂富集得到粗提物，粗提物进行高速逆流色谱分离，以体积比为1-5:5-10:1-10的溶剂A、溶剂B、溶剂C组成高速逆流溶剂体系，溶剂A为甲醇、乙醇、正丁醇或异丁醇，溶剂B为乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸正丁酯，溶剂C为水，上相为固定相，下相为流动相，分别制得哈巴俄苷、斩龙剑苷A。本发明采用高速逆流色谱法制备，不存在不可逆吸附，避免了样品的损耗，具有分离效果好，溶剂用量少，无污染，高效、快速的特点。

主权项

一种利用高速逆流色谱分离纯化制备哈巴俄苷和斩龙剑苷A的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)将玄参药材粉碎成粗粉，加入体积分数10％‑95％的乙醇溶剂中，加热至回流提取1‑3次，提取液趁热过滤，冷却，滤液减压除去溶剂，得到乙醇提取物；(2)哈巴俄苷、斩龙剑苷A的富集：将步骤(1)的乙醇提取物加入填充有大孔吸附树脂的色谱柱中，用水和甲醇或乙醇的混合溶剂梯度洗脱，收集含有哈巴俄苷、斩龙剑苷A的洗脱液，减压除去溶剂，干燥、得到哈巴俄苷、斩龙剑苷A混合粗提物；所述梯度洗脱条件为：先用2‑6倍柱体积的水洗脱，再用2‑6倍柱体积的体积分数10％‑30％乙醇或甲醇的水溶液洗脱，再用2‑6倍柱体积的体积分数30％‑50％乙醇或甲醇水溶液洗脱，再用2‑6倍柱体积的体积分数40％‑70％乙醇或甲醇水溶液洗脱，再用2‑6倍柱体积的体积分数60％‑95％乙醇或甲醇水溶液洗脱；(3)哈巴俄苷、斩龙剑苷A的纯化：将哈巴俄苷、斩龙剑苷A混合粗提物进行高速逆流色谱分离，以体积比为1‑5:5‑10:1‑10的溶剂A、溶剂B、溶剂C组成高速逆流溶剂体系，所述溶剂A为甲醇、乙醇、正丁醇或异丁醇，所述溶剂B为乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸正丁酯，所述溶剂C为水，将所述高速逆流溶剂体系混合充分后静置，按上下两相分开，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱，设定高速逆流色谱仪，在500～1000r/min转速下，以0.5～5mL/min的流速注入流动相，以波长190‑380nm的紫外检测器检测，当明显有流动相流出时，取哈巴俄苷、斩龙剑苷A混合粗提物，用上相、下相体积比1：1的混合溶剂溶解后进样，根据紫外检测器光谱图的峰形分别收集对应流出液，浓缩、干燥，分别制得哈巴俄苷、斩龙剑苷A。