一种基于膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法

摘要

一种基于膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法，用大孔树脂对发酵液进行吸附，然后再将乙酸乙酯浸提吸附后的大孔树脂，收集浸提液；用超滤膜过滤浸提液：并用乙酸乙酯洗滤，合并滤液，浓缩后，使用制备型HPLC检测，对分离得到的埃博霉素B组分进行结晶，得到埃博霉素B。本发明条件温和，操作简便，分离步骤少，选择性好，可显著提高埃博霉素B的得率，能够提供更有利于工业化生产的条件。采用膜过滤和结晶相结合的方法，可有效地去除一些大分子杂质，同时避免使用有机试剂减少工业生产污染，避免了埃博霉素B在其它复杂制备流程中的损失，并且结晶使制得的埃博霉素B具有较高的纯度，具有更广阔的应用前景和经济效益。

主权项

一种基于膜过滤技术的埃博霉素B分离提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)树脂对发酵液进行吸附：将纤维堆囊菌在液体培养基中进行发酵，并向液体培养基中加入经过处理的大孔树脂，发酵120‑150h后过滤得到吸附树脂，然后用蒸馏水清洗除去吸附树脂表面粘附的菌体；其中，大孔树脂的加入量为液体培养基体积的2‑5％；(2)乙酸乙酯浸提：用乙酸乙酯浸提步骤(1)中经过蒸馏水清洗的吸附树脂，收集浸提液；(3)用超滤膜过滤浸提液：将浸提液采用截留分子量为1000‑5000的超滤膜过滤以去除大分子杂质，得到粗提物；再将粗提物进行浓缩，得到浓缩液A；(4)使用制备型HPLC检测：将浓缩液A进行离心，收集上清液，再用HPLC检测并合并埃博霉素B组分；(5)结晶：将埃博霉素B组分进行真空浓缩，得到浓缩液B，将浓缩液B于‑20～‑10℃下进行低温结晶，得到白色粉末状结晶，即为埃博霉素B；所述步骤(3)中超滤膜的材质为聚砜、聚丙烯腈或聚酰胺；步骤(3)中超滤膜过滤的操作压力为0.1‑0.6MPa，温度为0‑40℃，控制流速为5‑10mL/min；所述步骤(1)中纤维堆囊菌菌株号为ATCC25532或ATCC25569；所述步骤(1)中大孔树脂为XAD‑16型大孔树脂，并且采用如下方法进行处理：首先，用3～5倍大孔树脂体积的甲醇浸泡大孔树脂，摇床震荡12h‑16h后，除去甲醇，水洗至无甲醇味；再用甲醇浸泡12h‑16h后，除去甲醇并水洗至无甲醇味；所述步骤(1)中液体培养基成分为土豆淀粉2.5～3.0g/L，蔗糖0.7～1.0g/L，葡萄糖0.2～0.5g/L，豆饼粉1.7～2.0g/L，MgSO₄·7H₂O 2.3～2.5g/L，CaCl₂3.0～3.5g/L，EDTA‑Fe³⁺2mL/L，微量元素0.5～1.0mL/L，pH值为7.2。