一种处理石化废水系统挥发性混合有机废气菌种的培养方法

摘要

本发明公开了一种处理石化废水系统挥发性混合有机废气菌种的培养方法，包括菌种样品采集，扩增培养，菌种驯化，菌种纯化，菌种鉴定。本发明的特点是：利用本发明所述的方法能够定向，稳定的筛选，分离，培养出可处理废气的菌种，培养出的菌种在处理大气量、复杂组分有机废气方面具有显著的除臭效果，投入成本低。

主权项

一种处理石化废水系统挥发性混合有机废气菌种的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品采集：用无菌取样瓶采集石化污水厂的底泥，放入恒温箱中待用，温度为28℃～35℃；(2)扩增培养：在好氧条件下，向底泥中加入10g/L的葡萄糖进行恒稳培养，温度为28℃～35℃，培养时间为2～3天；(3)菌种驯化：取底泥分装到装有液体富集培养基的锥形瓶中，然后分别加入苯酚、二甲苯，苯酚、二甲苯的加入量分别为10mL/L～12mL/L，在28℃～35℃温度下摇床恒温培养驯化，培养时间为3～5天；在驯化的培养液中用接种环提取培养液，接种到固体富集培养基中培养，培养2～3天后，将固体富集培养基上长出的细菌采用影印法将其接种到以苯酚、二甲苯或苯酚和二甲苯的混合为唯一碳源的固体选择培养基上培养，培养3～5天后观察其菌落，挑取不同形态的单菌落在液体选择培养基上培养，再次进行驯化，按上述驯化方法，连续驯化2～3次后接种到固体富集培养基上；(4)纯化菌种：在驯化好的固体富集培养基上挑取不同形态的单菌落在固体富集培养基上划线纯化，培养温度为28℃～35℃，培养时间2～3天，然后将纯化菌落接至分别以苯酚、二甲苯或苯酚和二甲苯混合为唯一碳源的固体选择培养基内进行恒温培养，培养温度为28℃～35℃，培养时间3～5天，不断地进行选择、富集培养，最终将纯化的菌落移接到斜面培养基中，从所分离的可以处理石化废水系统挥发性混合有机废气的菌种中，把其中的每一个菌种都采用相同的方法，平行接种于含有废气的固体培养基中，如果平行接种的菌落都能在废气中存活并处理废气，则为可选用的菌种之一，否则淘汰；上述各步骤中：所述的液体富集培养基的配置比例为：1000mL培养基中加入K₂HPO₄ 1.5‑2.5g、MgSO₄·7H₂O 3‑4g、牛肉膏3‑4g、(NH₄)₂SO₄ 1‑2g、NaH₂PO₄·3H₂O 1‑2g、尿素0.2‑0.3g、FeSO₄·7H₂O 0.002‑0.003g、MnSO₄·7H₂O 0.003‑0.004g、ZnSO₄·7H₂O 0.003‑0.004g、CoSO₄·7H₂O 0.001‑0.002g、葡萄糖15‑16g，调PH值为7.0；所述的固体富集培养基的配置比例为：1000mL培养基中加入K₂HPO₄1.5‑2.5g、MgSO₄·7H₂O 3.0‑4.0g、牛肉膏3‑4g、(NH₄)₂SO₄ 1‑2g、NaH₂PO₄·3H₂O1‑2g、尿素0.2‑0.3g、FeSO₄·7H₂O 0.002‑0.003g、MnSO₄·7H₂O 0.003‑0.004g、ZnSO₄·7H₂O 0.003‑0.004g、CoSO₄·7H₂O 0.001‑0.002g、葡萄糖15‑16g、琼脂15‑16g，调PH值为7.0；所述的固体选择培养基的配置比例为：1000mL培养基中加入苯酚或二甲苯或苯酚和二甲苯的混合12mL、MgSO₄·7H₂O 3‑4g、K₂HPO₄ 1.5‑2.5g、NaH₂PO₄·3H₂O 1‑2g、NH₄Cl 2‑3g、FeSO₄·7H₂O 0.002‑0.003g、MnSO₄·7H₂O0.003‑0.004g、ZnSO₄·7H₂O 0.003‑0.004g、CoSO₄·7H₂O 0.001‑0.002g、琼脂15‑16g、调PH值为7.0；所述的液体选择培养基的配置比例为：1000mL培养基中加入苯酚或二甲苯或苯酚和二甲苯的混合12mL，MgSO₄·7H₂O 3.0‑4.0g、K₂HPO₄ 1.5‑2.5g、NaH₂PO₄·3H₂O 1‑2g、NH₄Cl 2‑3g、FeSO₄·7H₂O 0.002‑0.003g、MnSO₄·7H₂O0.003‑0.004g、ZnSO₄·7H₂O 0.003‑0.004g、CoSO₄·7H₂O 0.001‑0.002g，调PH值为7.0；所述的斜面培养基的配置比例为：1000mL培养基中加入K₂HPO₄ 1.5‑2.5g、MgSO₄·7H₂O 3‑4g、牛肉膏1‑2g、(NH₄)₂SO₄ 1‑2g、NaH₂PO₄·3H₂O 1‑2g、葡萄糖6‑7g、琼脂15‑16g，调PH值为7.0。