一种蜡样芽孢杆菌多克隆抗体的制备方法

摘要

本发明提供了一种蜡样芽孢杆菌多克隆抗体制备方法，包括以下步骤：步骤一，富集：将蜡样芽孢杆菌活化后涂平板扩大培养；步骤二，固定：改良型沸水浴法使菌体表面成分固定，使抗原决定簇充分暴露；步骤三，乳化：用自组装乳化器将佐剂和菌体混合物制成均匀乳化液；步骤四，免疫：采用背部多位点为主，外周位点为辅的方式，进行动物免疫；步骤五，抗血清效价：采用ELISA方法评估抗血清效价，进行加强免疫；步骤六，取全血：采用水合氯醛麻醉，颈部动脉取全血；步骤七，抗血清制备：将兔全血适宜温度静置自然层析，离心分离抗血清；步骤八，纯化：利用正辛酸-硫酸铵法，纯化抗血清制备多克隆抗体；该制备方法得到的多克隆抗体效价高、特异性好，灵敏度强具有极大的应用优势。

主权项

一种蜡样芽孢杆菌多克隆抗体的制备，其特征在于，包括以下步骤：(1)富集：首先将蜡样芽孢杆菌的菌种活化，利用培养基将活化的蜡样芽孢杆菌菌种富集到一定的数量，洗涤制备菌液，高速离心，弃上清，得到菌富集沉淀，并用生理盐水洗涤沉淀；其中“一定数量”是指当培养的蜡样芽孢杆菌的菌体数量可以完全覆盖平板时，且菌层厚度为2～3mm；(2)固定：使用改良型沸水浴加热方法，使得蜡样芽胞杆菌的表面成分固定，抗原决定簇充分暴露，制备得到菌抗原；“改良型沸水浴加热方法”是指将菌沉淀首先浸润于液氮5～10min，然后快速完全溶解于5mL‑10mL浓度为0.9％的生理盐水中，置于沸水浴边加热边震荡15～20min；(3)乳化：将固定好的蜡样芽孢杆菌的生理盐水悬浮液调至合适菌浓度，分别添加一定剂量的佐剂1及佐剂2，利用自组装乳化仪处理分层混合物得到均匀的乳化液；其中佐剂1是氟氏佐剂，佐剂2是RIBI佐剂；(4)免疫：将制备得到的乳化液，以背部多位点为主，以腹股沟、腋窝、脚蹼的外周位点为辅的肌肉注射方式，及短免疫间隔方式，注射到新西兰大白兔体内；(5)抗血清效价：采用ELISA方法评估抗血清效价，符合标准后，对大白兔进行加强免疫，准备取全血；(6)取全血：采用水合氯醛对大白兔进行麻醉，从颈部动脉取全血；(7)抗血清制备：将兔全血在合适的温度静置，使抗血清自然层析，然后采用高速离心的方法将抗血清从全血中分离出来；(8)纯化：利用正辛酸饱和硫酸铵法，从兔血清中制备得到抗蜡样芽孢杆菌的多克隆抗体。