一种通过无细胞蛋白质合成系统表达脂肪酸脱饱和酶的方法

摘要

本发明公开了一种通过无细胞蛋白质合成系统表达脂肪酸脱饱和酶的方法，属于酶工程领域。本发明使用麦胚无细胞蛋白合成系统将来自高山被孢霉（Mortierella alpine）ATCC32222中的ω3脱饱和酶基因（FADS15）进行克隆表达，无需制备mRNA且表达量高，后续纯化步骤简单，为下一步进行该膜蛋白晶体结构和功能研究奠定了基础。

主权项

一种表达ω3脂肪酸脱饱和酶的方法，其特征在于，包括构建含编码ω3脂肪酸脱饱和酶的基因的重组质粒、制备脂质体，将重组质粒和脂质体先后加入到麦胚无细胞蛋白质表达系统表达ω3脂肪酸脱饱和酶；编码所述ω3脂肪酸脱饱和酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述ω3脂肪酸脱饱和酶的表达采用麦胚抽提物无细胞蛋白质合成试剂盒，向50μl反应体系中加入纯化得到的1‑2μg所述重组质粒，混匀后加入反应槽，于900rpm、24℃反应，反应10.5h后加入1.7‑2.5μl浓度30mg/ml的脂质体，继续反应5.5h后停止。