一种具有抑制癌细胞增殖作用的胶原蛋白活性肽的制备方法

摘要

本发明公开一种具有抑制癌细胞增殖作用的胶原蛋白活性肽的制备方法，通过木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的水解以及特定的纯化工艺，获得胶原蛋白活性肽。该胶原蛋白活性肽具有抑制癌细胞增殖的作用，如卵巢癌细胞，包括SKOV3、OVCAR3、436和SRO82，前列腺癌细胞，包括PC3、LnCAPC1、LnCAPC2。

主权项

一种具有抑制癌细胞增殖作用的胶原蛋白活性肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将明胶用水配制成浓度为10‑25％的明胶溶液；2)将所述明胶溶液加热至40‑75℃，调节pH至5.0‑6.5；加入木瓜蛋白酶进行酶解，获得第一酶解反应液；3)调节所述第一酶解反应液的温度至40‑75℃，调节pH至7.0‑8.5，加入胰蛋白酶，获得第二酶解反应液；4)调节第二酶解反应液的pH至5.5‑6.5；5)灭活第二酶解反应液中的蛋白酶；然后冷却第二酶解反应液至40℃以下，得到粗产物溶液；6)过滤所述粗产物溶液；7)用截留分子量为1500Da的超滤膜过滤所述粗产物溶液，获得第一透过液；8)用截留分子量为300Da的超滤膜浓缩所述第一透过液，获得浓缩液，冷冻干燥；9)采用阳离子交换柱对步骤8)的干燥产物进行纯化；10)对步骤9)得到的纯化产物进行脱盐处理，获得胶原蛋白活性肽溶液；11)对步骤10)得到的胶原蛋白活性肽溶液进行冷冻干燥，得粉末状胶原蛋白活性肽。