单酶切载体的构建方法

摘要

本发明提供了一种单酶切载体的构建方法，包括如下步骤：1)单酶切位点的筛选；2)在目的基因两端引入酶切位点；3)对载体和目的基因进行酶切和电泳切胶回收；4)对目的基因和载体混合液进行温度梯度预处理；5)使用连接T载体用的solutionI连接载体与目的基因。本发明提供了一种单酶切载体构建的新方法，极大地提高了单酶切连接效率，同时极大地缩短了其连接时间。通过本发明方法，单酶切连接效率显著提高，连接时间只需90min左右，极大节约了人力、物力，降低了单酶切操作难度。

主权项

一种单酶切载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：1)单酶切位点的筛选；2)在目的基因两端引入XhoI酶切位点；3)对载体和目的基因进行酶切和电泳切胶回收；4)对目的基因和载体混合液进行温度梯度预处理；5)使用连接T载体用的solution I连接载体与目的基因；所述步骤4)中，载体与目的基因按物质量浓度1：10的比例加入；所述步骤4)中，载体和目的基因混合液按以下程序处理：80℃：3min；55℃：15s；45℃：15s；16℃：30s；在16℃30s结束后再加入solution I，在16℃下连接90min。