一种蒙古沙冬青染色体荧光原位杂交的方法

摘要

本发明涉及细胞遗传学与分子生物学技术领域，具体涉及一种蒙古沙冬青染色体荧光原位杂交的方法。通过制备染色体玻片标本、18SrDNA、5SrDNA和端粒探针制备与探针变性、探针与染色体共变性、杂交与杂交后洗脱、制片与信号检测步骤，建立蒙古沙冬青染色体荧光原位杂交技术，本发明是一种快速、精确的染色体荧光原位杂交技术，观察到分散好、荧光信号强的染色体分裂相，能更好地辨析蒙古沙冬青染色体，以应用于蒙古沙冬青的核型分析与进化研究。

主权项

一种蒙古沙冬青染色体荧光原位杂交的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：染色体玻片标本的制备，蒙古沙冬青种子在28℃温箱中常规培养，待根尖生长至2‑3厘米时，切下生长旺盛的根尖在1.5毫升离心管中保持湿润，置密闭容器中用N₂O处理2.5小时，取出根尖用90%冰醋酸处理10分钟，即转入70%乙醇中固定，置‑20℃长期备用，取固定后的2‑3个根尖，用蒸馏水洗净，切生长点放入含1%果胶酶和2%纤维素酶的缓冲液中，37℃解离45分钟，离心先后用冷蒸馏水，无水乙醇洗涤两遍，最后放入30微升冰醋酸中，每张玻片滴5微升左右悬液展片，空气干燥后放紫外交联仪处理固定染色体，镜检分散良好的染色体玻片，置‑20℃长期备用；S2：18SrDNA、5SrDNA和端粒探针制备与探针变性，选取同属于豆科的植物大豆5SrDNA和18SrDNA序列设计引物，以蒙古沙冬青为模板扩增重复序列，采用Nick translation法制备探针，端粒采用拟南芥端粒DNA序列为探针，Am13引物为fwd和Am13以蒙古沙冬青为模板扩增重复序列。