一种用于核酸纯化的纳米磁珠

摘要

本发明提供了一种用于核酸纯化的纳米磁珠，其制备方法包括纳米微球的制备和表面修饰的过程。本发明通过水相反应得到一定大小的生物磁性微球，在其表面引入能吸附核酸的基团，利用二氧化硅带电性吸核酸的性质，能高效纯化多种复杂样品，从而实现核酸纯化的自动化，大大减少工作人员的工作量。并且本发明纳米磁珠具有分散性好，成本低，颗粒均一性好，磁珠大小可控性强的特点，能有效用于诊断试剂前期纯化以及临床核酸检测，在测序领域、生物磁性微球靶向治疗、生物医药开发领域有着广泛的应用前景和社会经济效益。

主权项

一种用于核酸纯化的纳米磁珠，其特征在于，所述纳米磁珠由以下步骤制备而成：步骤A)纳米微球的制备：在氩气保护下，在含有13～17g硫酸亚铁七水合物和8～12g三氯化铁六水合物的水溶液中，每间隔10分钟滴加1ml 0.4M～0.6M氢氧化钠溶液；当反应溶液变为胶状乳浊液时，每间隔20分钟滴加1ml 0.2M～0.3M氢氧化钠溶液，摇床持续摇匀，摇床速度100转/分钟，待出现磁性后，继续在氩气保护下反应4～10小时；随后在所得溶液中加入氯化钠，使氯化钠终浓度为0.5M～1M；室温静置18～36小时后使用去离子水漂洗至溶液pH为7；再使用0.2M～0.3M的氢氧化钠溶液配成磁珠体积百分比为20％～40％的磁珠悬液，即得；步骤B)通过表面修饰制备纳米磁珠：将步骤A)所得磁珠悬液在50℃～60℃条件下通入氩气并均匀搅拌；加入60g九水硅酸钠搅拌至完全溶解，每3min滴加0.5ml冰乙酸，摇床持续摇匀，摇床速度100转/分钟，搅拌2h；当pH值为6～8时，使用3倍于所述磁珠悬液体积的0.3M氯化钠溶液漂洗5次，再使用0.3M氯化钠溶液配制成磁珠体积百分比为20％～40％的磁珠悬液；在得到的磁珠悬液中加入30g PEG‑1750，摇床持续摇匀，摇床速度100转/分钟，搅拌24h；使用3倍于所述磁珠悬液体积的0.3M的氯化钠溶液漂洗5次；再使用0.3M氯化钠溶液和叠氮钠配制成磁珠体积百分比为40％～60％的磁珠悬液，即得所述纳米磁珠。